环境微生物学殷士学第10章.pptVIP

PPT研究院 POWERPOINT ACADEMY 2. Southern印迹(Southern blot) Southern印迹是确定特定DNA序列的方法，因系英国生物学家Edwin Southern于1975年发明而得名。该方法先将DNA经限制性内切酶消化成一系列长度不等的片段，然后通过琼脂糖凝胶电泳把各片段彼此分开；然后用碱处理凝胶，使DNA的片段变性；中和后，在高盐缓冲液中通过毛细作用在原位将变性后的单链核酸转印到硝酸纤维膜上，烘干、固定；用放射性标记探针进行杂交。 10.3.5　DNA标记序列扩增 1.进化指针序列2.功能基因的序列(Functional gene sequences)3.随机扩增多态性DNA(Randomly amplified polymorphic DNA) 1.进化指针序列 1)该分子必须广泛存在于所有的研究对象中。2)该分子在各个对象中必须具有完全相同的功能，否则就不能比较微生物彼此之间的进化关系。3)该分子的序列在不同物种之间可以比较(Align)。4)该分子序列的变化速度与进化距离之间成对应关系。 2.功能基因的序列(Functional gene sequences) 利用16S rRNA基因序列，可以了解环境样品中微生物种群组成，但是较难将群落结构与功能相关联。系统发生学上极为近似甚至完全相同的两个菌株也不一定具有完全相同的功能