培养基的灭菌4.PPTVIP

1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 思考： 2、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 3、在作第二次以及其后的划线操作时，起点有什么要求？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 恒温振荡器 恒温培养箱 Logo biology 实验一 大肠杆菌的培养和分离 鲁迅中学生物组 第一部分 微生物的利用 一、有关微生物的基础知识 结构 分裂 生殖 变异类型 在基因工程中的应用 1、细菌的外形与大小 大肠杆菌属于杆状菌 图1-1 常见的三种细菌典型形态 A.球菌 B.杆菌 C.弧菌 根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。 自养菌: 异养菌: 2、细菌的营养类型 光能自养型:光合细菌 大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌 腐生菌 寄生菌 大部分病原菌 3、细菌的革兰氏染色 革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的差别在于细胞壁的成分、结构不同。 大肠杆菌属于革兰氏阴性菌 1.培养基的类型（根据物理性质分）： 二、细菌的培养——培养基 液体培养基：扩增细菌、工业生产 固体培养基：纯化（分离），鉴定、保藏菌种 固体培养基中有凝固剂：琼脂 培养基成分一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、生长因子等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH 、氧气、渗透压的要求． 自养微生物以二氧化碳或碳酸盐为惟一碳源进行代谢生长；异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。 碳源是异养微生物的主要能源物质。 对许多微生物来说，既可利用无机态氮，也可利用有机态。? 固氮微生物可以利用氮气作为氮源进行生长。 2. 培养基成分 调节并维持细胞的渗透压平衡等 细菌通常为中性偏碱；霉菌通常为中性偏酸 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 细菌喜荤，霉菌喜素 例如大肠杆菌LB液体培养基配方： 酵母提取物0.25g 蛋白胨0.5g NaCl0.5g 水50ml 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 二、细菌的培养——菌落 菌落是鉴定菌种的重要依据。 单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也用于筛选高表达量的菌株 1.无菌技术的概念 在分离、转接及培养微生物时，防止其他微生物污染的技术。包括环境、培养基及仪器设备的灭菌、消毒、接种及培养过程的无菌操作等。是成功地培养微生物的关键。 二、细菌的培养——无菌技术 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 消毒是指杀灭病原微生物的方法；灭菌是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法。 ①灼烧灭菌 3.常用的灭菌方法 ②高压蒸汽灭菌： 1kg/cm2压力、 121 ℃下维持15min. 过滤除菌（如G6玻璃砂漏斗） 紫外灯杀菌 其它灭菌消毒方法 微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存 三、大肠杆菌的培养和分离实验操作 三、大肠杆菌的培养和分离实验操作 （一）培养基的配置与灭菌 取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压蒸汽灭菌锅灭菌15min。 LB液体培养基——细菌的扩大培养 LB固体培养基——细菌的划线分离 既通气又不使菌进入 酵母提取物0.25g 蛋白胨0.5g NaCl0.5g 水50ml 酵母提取物0.25g 蛋白胨0.5g NaCl0.5g 水50ml +1g琼脂 （二）倒平板 灭菌后的培养基在超净台上，酒精灯火焰旁，倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面 注意事项： 1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板。 2.灭菌及消毒：超净台用紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒。