连续灭菌营养成分破坏少.PPTVIP

第二讲 第四章 培养基及其设计、制备、优化、灭菌 第四节 发酵培养基的灭菌及相关设备 第四节 发酵培养基的灭菌技术及相关设备 灭菌技术(工业生产、实验室） 灭菌是指用化学或物理的方法杀灭或去除物料及设备中所有生命物质的技术或工艺过程。 工业上常用灭菌方法： 干热灭菌法 湿热灭菌法 辐射（射线）灭菌法 化学药品灭菌法 过滤除菌法 1、干热灭菌法：是一种极端的手段，温度高、时间长。 原理：氧化作用是干热灭菌的主要根据。 温度系数Q10，即温度升高10℃，灭菌速度常数增加的倍数。 嗜热脂肪芽孢杆菌：2.86 枯草杆菌黑色亚种：2.72 2、湿热灭菌 2.1湿热灭菌的原理：是直接用饱和蒸汽进行灭菌。蒸汽冷凝时释放大量潜热，并具有强大的穿透力，使微生物细胞中的蛋白质、酶、核酸极易发生不可逆的凝固变性，导致短时间内死亡。 由于湿热灭菌有经济快速等特点，因此发酵工业中处理大量培养基时广泛采用湿热灭菌。 嗜热脂肪芽孢杆菌Q10 ：2.86(干热) 14.28(湿热) 枯草杆菌黑色亚种Q10 ：2.72 (干热) 3.71 (湿热) 2.2 湿热灭菌理论灭菌时间的确定 生产上要选择合适的时间和灭菌温度，既彻底灭菌又使培养基营养成分的破坏减至最底限度。 杂菌在一定温度下，受热死亡遵循一级反应动力学的规律这就是对数残留定律。 -dN/dt=kN N—菌的残留数（个） t—灭菌时间， dN/dt —菌的瞬时变化速率，个/s k—菌死亡的反应速度常数，1/s -dN/dt=kN 积分得： t=2.303/ k（lgN 0/Ns ） N 0—灭菌初始时培养基菌数，个/ml Ns—灭菌一时间段后培养基菌数，一般取0.001个/ml k 表示微生物的耐热性。 灭菌温度T与菌死亡反应速度常数K的关系：对 于一定的菌种，灭菌温度与k 的关系可用阿累尼 乌斯方程表示： k=Ae-E/RT 取耐热性芽孢杆菌的A、E值进行计算， lgk=14847/T + 36.127 式中 A—阿累尼乌斯常数，1/S E—杀死细菌孢子的活化能，4.187J/mol T—热力学温度，K R—气体常数，1.987×4.18J/(K.mol) e—2.71 3、工业生产培养基的灭菌 3.1 分批灭菌（实罐灭菌） 3.1.1 典型发酵罐接管图 典型发酵罐接管图 3.1.2分批灭菌的操作过程： a.培养基的预热：灭菌培养基需先加热到80—90℃ ，然后再导入蒸汽升温灭菌。预热目的是防止蒸汽直接导入培养基温差大，导致大量冷凝水，稀释了培养基；防止直接蒸汽导入引起泡沫急剧上升而溢料。预热方法是先将各排气阀打开，将蒸汽引入夹套或蛇管进行预热，等罐温升到80—90℃ ，将排气阀逐渐关小。 b.将蒸汽从进气口、出料口、取样口直接导入罐内同 时开排气管排气阀、补料管排气阀、接种管排气阀、消沫剂管排气阀，各路进、排气要通畅（三进四出），罐内液体翻动要剧烈，以使物料温度均一。 c. 排气量不宜过大，以节约蒸汽用量。 d. 罐温上升到120℃—130℃ ，罐压105Pa，保温30分 e. 灭菌将要结束时，立即用无菌空气保压（注意此时罐内压力必须低于过滤器压力，否则将出现培养基倒流），再开冷却水降温待种，以防罐压迅速下降产生负压而吸入外界空气。 3.2 连续灭菌（连消） 连续灭菌即培养基在发酵罐外经过一套连续灭菌设备，以比分批灭菌高的温度和较短的时间进行快速连续加热灭菌，并快速冷却，再立即输入预先经过空罐灭菌后的发酵罐中。 3.2.1 喷淋冷却连消流程 培养液预热：待灭菌的培养液预热到60℃ —75℃ 。 连续灭菌：由连消泵送到连消塔式底，料液在此被加热到灭菌温度，由顶部流出，一般控制培养基输入连消塔的速度 0.1m/min，温度132℃ ，在塔内的停留时间为20—30s。 维持灭菌温度：连消后料液再输入维持罐保温一定时间。在生产实际中，一般维持5—8min。 理论维