H9亚型禽流感病毒钦州株HA基因的克隆与遗传进化.pdf

H9亚型禽流感病毒钦州株HA基因 的克隆与遗传进化 陈进喜 ，张华智 ，黄 梅 ，郑彦梓 ，翟成兵 ，熊 毅 ，郑 敏 ，施开创 。 (1．钦州市动物疫病预防控制中心，广西钦州535099；2．钦州市畜牧站，广西钦州 535099； 3．广西动物疫病预防控制中心，广西南宁530001) 摘 要：采集钦州活禽交易市场的鸡气管和泄殖腔的棉拭予样品，用H9亚型分型引物进行 PCR初步筛选，阳性 样品经SPF鸡胚尿囊腔接种分离病毒，通过RT-PCR方法扩增HA基 因，并将其克隆到pMD—l8T载体后进行序 列测定和分析。结果表明，获得 1株H9亚型禽流感病毒命名为：A／ChickenG／uangxi／qz40／2009(简称qz40)。 测序结果表明qz40的HA基因片段全长 1683bp，编码560个氨基酸；序列同源性比较结果表明，该毒株与参考 毒株的核苷酸序列同源性为82．8％99．9％，推导氨基酸同源性为87．5％．99．6％；HA基因的裂解位点氨基酸顺序 为RSSR IGLF，为低致病性毒株；含有7个潜在的N．糖基化位点，其中5个位于HA1部分、2个位于HA2 部分；基于H9亚型HA基因的进化树分析表明，qz40株属于欧亚种系的AC／hicken／Beijing／1／94 (Ck／Bei—like) 群 系。 关键词：禽流感病毒；H9N2亚型；HA基因；遗传发生关系 中图分类号：$852．659．5 文献标识码：A 文章编号：1005—944X (2014)03—0072—05 CloningandphylogeneticanalysisofHAgeneofanavianinfluenzavirusH9subtype isolatefromQinzhouofGuangxi ChenJinxi，ZhangHuazhi，HuangMei，ZhengYanzi，ZhaiChengbing，XiongYi，ZhengMin，ShiKaichuang (1．QinzhouCenterforAnimalDiseasePreventionandControl，Qinzhou，Guangxi535099：2．QinzhouAnimal HusbandryStation，Qinzhou，Guangxi535099；2．GuangxiCenterofrAnimalDiseasePreventionandControl， Nanning，Guangxi530001) Abstract：InordertoexploretheepidemicruleofH9subtypeavianinfluenzavirusinQinzhouarea，specimensofpaired trachealandcloacalswabswerecollectedfrom livepoultrymarketsinQinzhouandscreenedbyPCRwithH9subtyping primers，thenthepositivespecimensweresubjectedtovirusisolationbyusingSPFchickenembryos．OneinfluenzaAvirus wasdeterminedasH9subytpebyRT-PCR，namedA／Chicken／Guangxi／qz40／2009(qz40inshort)．ThecDNA oftheqz40 HA genewasamplifiedbyRT-PCR andsequenced．TheresultsshowedthatthefulllengthofHA geneconsistedof1683 nucleotides(nt)encoding560aminoacid，nucleotideandaminoacidsequencehomologyofHA genewas82．8％一99．9％and 87．5％一99．6％，respectively．Geneticanalysisrevealedthattheqz40hadanRSSRlGLFmotifatthecleav