HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系.pdf

772 ChineseJournalofClinicalMedicine，2013．Vo1．20，No．6 中国临床医学 2013年 12月 第 20卷 第 6期 论著 HIF一2 基因与人肺腺癌 A549细胞株 对顺铂耐药性的关系 吴倩’ 袁凯 钱成 王勇” 童继春 袁卫东¨ (1．南京医科大学附属常州第二人 民医院血液肿瘤科 ，胸心外科 ， 江苏常州 213003；2．复旦大学附属 中山医院胸外科 ，上海 200032) 摘要 目的：探讨小干扰 RNA(smallinterferingRNA，siRNA)沉默缺氧诱导 因子 2 (hypoxiainduciblefactor2alpha，HIF一 2a)基 因表达后 ，人肺腺癌 A549细胞株对顺铂耐药性的变化 。方法 ：构建靶 向HIF一2d基 因的 siRNA真核表达载体并转染 A549细胞 ，采用 Real—timePCR检测 HIF-2dmRNA的表达 ，采用Westernblotting检测 HIF-2c~及多药耐药基 因1(multidrug resistanee一1，Mdr一1)蛋 白的表达 ，采用 MTT法检测顺铂处理后细胞的存活率。结果 ：在 HIF2asiRNA 转染A549细胞后24、 48h后 ，HIF-2d在 mRNA和蛋白水平的表达与空白对照组相 比均显著下调 (均 P0．01)，Mdr一1蛋 白的表达水平也 明显降 低 (均 P()．05)。与空白对 照组相 比，HIF2dsiRNA组细胞对顺铂 的敏感性 明显增加 ，各 时间点的 IC 值均显著降低 ，差异 有统计学意义(均P()．01)。结论：靶向HIF一2“的siRNA表达载体能够有效抑制HIF一2a基因的表达，从而逆转A549细胞 对顺铂 的化 疗耐药性 。 关键词 肺腺癌 ； 化疗耐药 ； 缺氧诱导因子 2a； 小干扰 RNA； 多药耐药基 因 1 中图分类号 R734．2 文献标识码 A RelationshipbetweenHIF一2“GeneandChemotherapyResistanceofLungAdenocarcinomaA549CellstoCis— platin WU Qian L4N Kai QIAN Cheng W_ANG Yong T0NG Jichun 础 N． WP— dong 1．DepartmentofHematologyandOncology， DepartmentofThoracicSurgery，Changzhou SecondPeople’sHospital，NanjingMedicalUniversity，Changzhou 213003，China；2．Departmentof ThoracicSurgery，ZhongshanHospital，FudanUniversity，Shanghai 200032，China Abstract Objective!Toinvestigatetheeffectofsilencinghypoxiainduciblefactor-2alpha(HIF一2a)geneexpressionbysmall interferingRNA (siRNA)onchemotherapyresistanceofA549cellstocisplatin．M ethods：ThesiRNA eukaryoticexpression vectorstargetingHIF一2agenewereconstructedandtransfectedintoA549cells．TheexpressionofHIF2amRNA wasdetected byreal—timePCR．TheexpressionofHIF一2aandmultidrugresistance1 (Mdr-1)proteinsweredetectedbyWesternblotting． MTT assaywasusedtoexplorethesurvivalrateofA549cellsunderthetreatmentof