DNA测序技术及其应用.ppt.ppt

测序过程： dNTP的3‘羟基被化学方法保护 每轮合成反应只能添加一个碱基 测序过程： GenomeAnalyzer系统需要的样品量低至100ng，文库构建过程简单，减少了样品分离和制备的时间，配对末端读长可达到2×50bp，每次运行后可获得超过20 GB的高质量过滤数据，且运行成本较低，是性价比较高的新一代测序技术。 小结 2.3 SOLiD技术 SOLID通过连接反应进行测序。其基本原理是以四色荧光标记的寡核苷酸进行多次连接合成，取代传统的聚合酶连接反应。具体步骤包括： 文库准备 扩增 微珠与玻片连接 连接测序 与454测序类似 SOLiD系统与454测序系统相比，每张玻片能容纳更高密度的微珠，在同一系统中轻松实现更高的通量。 测序过程： 连接酶 八聚核苷酸 模板 通用测序引物n 超高通量是SOLID系统最突出的特点，目前SOLID 3单次运行可产生50 GB的序列数据，相当于17倍人类基因组覆盖度。 小结 表1 三种二代测序技术对比 4. 第三代DNA测序技术 第二代的高通量测序技术已经得到了很好的发展和应用, 但是由于其测序速度、成本、准确度等关键问题的解决仍存在困难,研究者们很快将目光转向了更高更新的测序解决方案。 单分子测序也就应运而生。 2009年12月,中科院北京基因组研究所与浪潮成立“中科院北京基因组研究所—浪潮基因组科学联合实验室” 三代测序技术是以单分子测序为特点的测序技术 单分子即时DNA测序技术(SMRT) HeliScope单分子测序 基于荧光共振能量转移的即时DNA测序 纳米孔单分子测序技术 第三代测序技术 1、目前一期的读取速度为3bp/ s 2、它实现了DNA聚合酶内在自身的processivity（延续性，也就是DNA聚合酶一次可以合成很长的片段），一个反应就可以测非常长的序列。 3、它的精度非常高，达到99.9999%。 标记荧光基因 DNA聚合酶作用 显微镜下进行荧光探测 零级波导的纳米结构来实现即时观察和背景荧光干扰 4.1 单分子即时DNA测序技术 零级波导的纳米结构 小孔的尺寸低于光的波长，小孔底部形成消逝波，创造很小体积的检测空间 DNA链周围游离的荧光标记dNTP有限，非常快速进出于小孔，稳定的背景荧光信号 荧光标记dNTP被掺入到DNA合成链，其携带的特定荧光会持续一小段时间(荧光光曝) DNA聚合酶 4.2 HeliScope单分子测序 优点：采用了一种新的荧光类似物和更加灵敏的监测系统，能够直接记录到单个碱基的荧光，从而克服了第二代测序必须用PCR扩增出数千个拷贝以增加信号亮度的缺陷。 DNA聚合酶 荧光标记的dNTP 产生荧光 CCD记录 发生了碱基延伸反应 平面基板模拟图 4.3 基于荧光共振能量转移的即时DNA测序 荧光供体 DNA聚合酶 荧光受体 4种dNTP 荧光共振能量转移具体过程 优点： 游离的dNTP不发光，只有其掺入到新合成的DNA链时才会发光，极大地降低了背景荧光干扰 此方法不需要用到持续的高能量的激发光照射，因此也能够极大地减少DNA聚合酶的光损伤作用，进一步延长了测序长度。 能量 * DNA测序技术的发展与应用 指导老师：张椿雨 小组成员：胡娜娜，武巧 ，姚淼，贾明明 引言 第三代测序技术 测序技术的应用与展望 第一代测序技术 第二代测序技术 1 引言 DNA序列测定的意义 DNA的序列测定是分子生物学研究中的一项非常重要的和关键的内容。如在基因的分离、定位、基因结构与功能的研究、基因工程中载体的组建、基因表达与调控、基因片段的合成和探针的制备、基因与疾病的关系等等，都要求对DNA一级结构的详细了解。 造福人类的HGP 人类基因组计划（Human Genome Project－HGP）于1990年正式启动，其主要目标有：识别人类DNA中所有基因（超过10万个）；测定组成人类DNA的30亿碱基对的序列；将这些信息储存到数据库中；开发出有关数据分析工具；致力于解决该计划可能引发的伦理、法律和社会问题。已于2003年完成。 　　人类基因组计划是当代生命科学一项伟大的科学工程，它奠定了21世纪生命科学发展和现代医药生物技术产业化的基础，具有科学上的巨大意义和商业上的巨大价值。 DNA测序技术的历史与发展 测序技术最早可以追溯到20世纪50