六味地黄丸有效成分测定.docVIP

六味地黄丸有效成分测定 　　论文摘要：文章分析了六味地黄丸（浓缩丸）有效成份的含量测定技术。 主题词： 六味地黄丸 测定 中图分类号：Q501 六味地黄丸（浓缩丸）质量标准收载于部颁标准第11册。该方出于宋代?钱乙《小儿药证直诀?卷下》，系中医补肾的经典方，为滋阴补肾之著名方剂。笔者 参考 《 中国 药典》对该产品进行研究，在原部颁标准的基础上，对质量标准进行整理提高，用HPLC法测定牡丹皮中丹皮酚及山茱萸中马钱苷的含量，并进行了方法学考察。现将结果报道如下。 1 仪器与材料 1.1 仪器Waters液相色谱仪，Waters2487双波长紫外检测器，515泵（美国），7715 i进样器（美国），Empower色谱工作站（美国），C18色谱柱（依利特：250 mm×4.6 mm，5 μm）。 1.2 试剂甲醇、乙腈为色谱纯（中国上海陆都试剂厂），乙醚、乙醇、磷酸、四氢呋喃等均为分析醇，水为高纯水。 1.3 对照品丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所，110708-9704），马钱苷对照品（中国药品生物制品检定所，111640-200401） 1.4 样品六味地黄丸（浓缩丸）为苏州长甲药业有限公司生产。 2 方法与结果 2.1 牡丹皮的含量测定 2.1.1 色谱条件C18柱（依利特；250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇-水（6：4），流速1.0 ml?min-1，柱温30℃，检测波长为274 nm。 2.1.2 供试品溶液的制备取本品适量，研细，精密称取0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30 min（功率250 W，频率40 kHz），放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。 2.1.3 对照品溶液的制备精密称取对照品适量，加甲醇制成每毫升含16 μg的溶液，作为对照品溶液。 2.1.4 空白对照实验按处方去牡丹皮制成空白制剂，取空白对照样品0.44 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，与供试品制备相同方法制得缺牡丹皮空白溶液。分别取出对照品溶液、样品供试液、空白对照溶液依法进样检验。结果显示空白对照无干扰。 2.1.5 线性关系的考察精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇稀释至54.1 μg/ml，摇匀。分别精密吸取丹皮酚对照品溶液1，2，3，4，5 ml，加甲醇稀释至10 ml，摇匀，分别得浓度为5.41，10.82，16.23，21.64，27.05 μg/ml的丹皮酚溶液。照高效液相色谱法，进样10 μl，测定其峰面积。以峰面积为纵坐标，以进样量（ng）为横坐标，进行回归处理，结果显示：丹皮酚溶液在54.1～270.5 ng的范围内线性关系良好。其回归方程为Y=9 636.508X-545.6。相关系数r=0.999 6。 2.1.6 精密度实验精密称取供试品（批号0501102）0.5 g，按2.1.2方法制成供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μl，测定峰面积。RSD=0.99%（n=6），表明精密度良好。 2.1.7 稳定性实验取精密度供试液，分别在0，2，4，6，8，12 h进样，测定峰面积，RSD=1.07%，结果表明丹皮酚溶液在12 h内稳定。 2.1.8 重复性实验精密称取供试品（批号0501102）6份，分别按供试液制备项下的方法制备供试品溶液，依法进行含量测定。RSD=1.32%。 2.1.9 加样回收率实验精密称取已知含量的供试品0.25 g各6份，分别加入一定量的丹皮酚对照品溶液，按供试品制备项下的方法制备。依法测定， 计算回收率。 2.2 山茱萸的含量测定 2.2.1 色谱条件C18柱（依利特；250 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈-水（15：85），流速1.0 ml?min-1，柱温25℃，检测波长为236 nm。 2.2.2 供试品溶液的制备取本品约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%的甲醇100 ml，称定重量，超声处理10 min（功率250 W，频率40 kHz），放冷，再称定重量，用50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液40 ml过5 cm柱高中性氧化铝柱（内径1 cm），再以50%甲醇50 ml洗脱，合并流出液和洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇溶解，并转移至10 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。 2.2.3 对照品溶液的制备精密称取马钱苷对照品适量，加50%甲醇制成每毫升含20 μg的溶液，即得。 2.2.4 线性关系考察精密吸取0.233 mg/ml的马钱苷对照品溶液1，