血清γ－球蛋白的分离纯化及鉴定.PPT

第八章 蛋白质分离纯化技术 ①溶解度不同 ②分子大小不同 ③带电荷的性质不同 ④物理吸附性质不同 ⑤生物学的亲和性不同 第一节 利用溶解度差别的分离方法 一、溶液pH值的影响 当溶液的pH值与蛋白质的等电点相同时，蛋白质分子呈现出电中性，分子间无斥力作用，易于积聚和沉淀，蛋白质的溶解度最小 不同的蛋白质由不同的氨基酸组成，因此其等电点也不同 达到粗分蛋白质组分的目的 二、某些蛋白质沉淀剂的作用 有些离子型的表面活性剂，可以通过改变蛋白质带电性质使其沉淀下来 三、溶液中盐离子浓度的影响 盐离子对蛋白质溶解度的影响随其浓度不同而不同 加入中性盐使蛋白质溶解度增加的现象称为盐溶作用 盐浓度增大，盐离子可与蛋白质离子竞争溶液中的水分子，从而降低了蛋白质分子的水合程度。失去水化层的裸露的蛋白质分子易于积聚而沉淀，此现象称为盐析 不同的蛋白质分子发生盐析所要求的盐离子的浓度不同，因此可以通过在蛋白质溶液中加入不同量的中性盐，使要分离的蛋白质与杂质分离开来 常用做盐析的中性盐是硫酸铵 硫酸铵分级沉淀法 四、溶剂极性的影响 加入有机溶剂沉淀蛋白质是粗提蛋白质常用的方法之一，但应用时一定要注意控制温度，因温度较高时蛋白质分子易变性 五、温度的影响 蛋白质的溶解度随温度的升高而增加 六、分配层析 分配层析的原理是每种物质在不同的溶剂相中的溶解度不同。当