人c反应蛋白在不同原核表达载体及菌株中的表达及-生物技术通报.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2016, 32 3 :166-170 人 C 反应蛋白在不同原核表达载体及菌株中的表达及 免疫反应性分析 李江峰  矫丽媛  赵晓妮  王继华  才蕾 （广州万孚生物技术股份有限公司，广州 510660） 摘 要 ： 构建人C 反应蛋白（CRP）原核表达载体，并分别将其转化进入E.coli BL21（DE3）和Rosetta gami 2（DE3）pLysS 中， 诱导CRP 重组蛋白的表达 ；主要运用了基因工程，亲和层析及透析复性等方法。成功构建了CRP 原核表达载体及菌株。经IPTG 诱导后，得到了不同的重组CRP 蛋白。结果表明，相同表达载体在不同的表达菌株中的表达情况有一定差别，分别在大肠杆菌及 Rosetta gami2（DE3）pLysS 中表达并得到了重组CRP 的包涵体，对复性后的CRP 重组蛋白进行Westen blotting 及ELISA 检测，结 果表明原核表达的重组CRP 蛋白的免疫反应性很低，CRP 蛋白发挥免疫活性需要以五聚体形式存在。 关键词 ： C 反应蛋白 ；原核表达 ；包涵体；复性 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016.03.026 The Expression and Immunoreactive Analysis of Recombinant Human - C reactive Protein in Different Prokaryotic Expression Vectors and Strains - - - - LI Jiang feng JIAO Li yuan ZHAO Xiao ni WANG Ji hua CAI Lei （Guangzhou Wondfo Biotech Co. ，Ltd ，Guangzhou 510660 ） Abstract: The prokaryotic expression vector of human C-reactive protein（CRP）was constructed and transferred into Escherichia coli BL21（DE3）and Rosetta gami2（DE3）pLysS，respectively，and then these recombinant strains were induced for the expression of CRP. Mainly gene engineering，affinity chromatography and dialysis refolding methods were employed. The expression vectors and recombinant strains of human CRP were constructed successfully，and the varied CRPs with different protein tags were acquired by IPTG. In conclusion， expressions of the same vector in different strains differed ；it expressed in the E. coli BL21（DE3）and Ros