pPIC9K_IL_2重组质粒的构建及其在毕赤酵母中的表达.pdfVIP

年 月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 卷 ２０１４ ６ ４９ 　 　 　 　 　 　 　 　 第 期 双 月 刊 ３ ３２ ３６ ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＡＮＳＵ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ～ 　 　 　 　 重组质粒的构建及其在 ＰＩＣ９Ｋ ＩＬ２ ｐ － － 毕赤酵母中的表达 ， ， ， １ １ １ １ １２ １２ １２ ， ， ， ， ， ， 刘斌 祁光宇 陈晓宇 王宇 牟克斌 黄银君 刘学荣 （ ， ； 中农威特生物科技股份有限公司 甘肃兰州 中国农业科学院 １． ７３００４６２． 　 ， ） 兰州兽医研究所 甘肃兰州 ７３００４６ 　 ： （ ） ， ， 摘要 根据 序列设计 对引物 用 法扩增的目的基因进行克隆 将测序正确 Ｏｖｉｓａｒｉｅｓｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ＩＬ２ １ ＰＣＲ 　 　 － ， 的 基因片段和表达载体 同时双酶切后相连 构建 重组表达载体 将线性化的载体 ＩＬ２ ＰＩＣ９Ｋ ＰＩＣ９Ｋ ＩＬ２ ． － ｐ ｐ － － ， ， （ ／ ） ＰＩＣ９Ｋ ＩＬ２电转化毕赤酵母ＧＳ１１５ 对重组酵母转化子经 ＭＤ 平板筛选和 ＰＣＲ分析鉴定后 用 Ｇ４１８ ４ Ｌ 筛 ｐ － － ｇ ， ： ， 选到多拷贝菌株 进行不同条件下甲醇诱导表达 结果表明 经 鉴定