河南番茄褪绿病毒的分子鉴定.pdfVIP

2015（12）：25-28 中 国 蔬 菜 研究论文 CHINA VEGETABLES 河南番茄褪绿病毒的分子鉴定 胡京昂　万秀娟　李自娟　黄　文　李武高　应芳卿 （郑州市蔬菜研究所，河南郑州450015） 摘　要 ：2014年在河南省郑州、济源、新郑、中牟、扶沟等地发现大量保护地番茄植株的叶脉间出现褪绿症状，疑似由番 茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus ，ToCV）侵染引起。以这5个地区的番茄病叶为样本提取总RNA，利用ToCVHSP70h （Heat shockprotein70homolog，热激蛋白70家族）基因的特异引物对样本进行RT-PCR检测，均扩增出约460bp大小的目的条带。 PCR产物测序和序列分析结果表明，该序列与国际上报道的ToCVHSP70h 的序列相似性达到99%以上，表明ToCV是为害 河南省番茄产区造成褪绿症状的主要病原之一。 关键词 ：河南省；番茄褪绿病毒；RT-PCR；分子鉴定 近几年来，由烟粉虱（Bemisia tabaci ）传播 间疑似感染ToCV的番茄叶片为样品，提取植物总 的多种病毒病对国内番茄生产造成了巨大的损失， RNA，经RT-PCR、PCR检测和序列对比分析，以 尤以番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl 期明确其病原，为进一步防治该病害奠定基础。 virus ，TYLCV）、番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis 1　材料与方法 virus ，ToCV）和番茄侵染性褪绿病毒（Tomato . 　试验材料 infectious chlorosis virus ，TICV）最为突出（张穗等， 1 1 2006；胡京昂等，2010；胡京昂等，2013）。 1.1.1　 病 毒 样 本　2014年8月在河南省郑州、 1998年，美国佛罗里达州首次发现了番茄褪 中牟、新郑、济源和扶沟等5个地区的番茄大棚 绿病毒（Wisleretal．，1998），之后意大利、巴 中，采集叶脉褪绿、黄化的番茄叶片，分别编号为 西、以色列等国也相继进行了报道（Accottoetal．， T-ZZ、T-ZM、T-XZ、T-JY和T-FG，并同时采集 2001；Segevetal．，2004；Freitasetal．，2012）。该 相应大棚中健康番茄叶片作为阴性对照。 病毒属长线形病毒科（Closteroviridae ）毛形病毒属 1.1.2　 生 化 试 剂　TRIzol 购 自Invitrogen公司； Crinivirus RTaseM-MLV（RNaseH- ）、RNaseInhibitor 购 （ ），在自然条件下通过粉虱传播，可以 Taq 侵染茄科、番杏科、苋科、夹竹桃科、藜科、菊科 自Promega公司；凝胶回收纯化试剂盒、 酶 和蓝雪科等植物，不能通过摩擦接种传播（Winter- 和DL2000Marker均购自杭州博日科技有限公 司；dNTPs和T4   自TaKaRa公司； mantelWisler，2006）。 DNALigase 购 我国最早于2013年发现番茄褪绿病毒，该病 GeneFinderTM 购自厦门百维信生物科技有限公司。 毒会引起番茄叶片褪绿和黄化，尤以植株下部叶片 1.1.3　菌株和载体　大肠杆菌（Escherichia coli ） 叶脉浓绿，叶脉间褪绿、黄化最为明显，貌似缺素 DH5α菌株由郑州市蔬菜生物技术重点