猪流行性腹泻病毒一步法RT_PCR检测方法的建立与初步应用.pdfVIP

2015年第36卷第10期 总第487期 SILIAOGONGYE 猪流行性腹泻病毒一步法RT-PCR 检测方法的建立与初步应用 1，2 3 4 1，2 1，2 1，2 1，2 1，2 1,2 1，2 ■于学武 王珊珊 曹明慧 赵凤菊 姚 伟 崔基贤 刘坤洋 陈 瑶 魏 澍 顾贵波 （1.辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁沈阳 110164；2.辽宁省动物医学研究院，辽宁沈阳 110164； 3.辽宁省畜牧兽医局，辽宁沈阳 110001；4.中国兽医药品监察所，北京 100081） 摘 要：猪流行性腹泻(PED)在全球的大流行给养猪业造成重大经济损失，为快速特异地检测猪流行性腹 泻病毒(PEDV)，本研究根据PEDVN基因保守序列设计合成引物，通过对RT-PCR反应体系和反应条件优化， 建立了一步法RT-PCR检测PEDV的方法。结果显示，该方法检测敏感性达2016拷贝/μl；对猪传染性胃肠炎 病毒、猪A群轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等检测结果均为阴性，具有良好的特异性；批内 变异系数为1.14%~2.15%，批间变异系数为2.46%，具有良好的重复性。应用该方法对辽宁省93份临诊病 料进行了检测，样品阳性率为69.89%(65/93)，为PED的快速诊断和流行病学调查提供了有效的技术手段。 关键词：猪流行性腹泻病毒；一步法RT-PCR；诊断 doi:10.13302/ki.fi.2015.10.014 中图分类号：S852.4 文献标识码：A 文章编号：1001-991X（2015）10-0053-04 Developmentandpreliminaryapplicationofone-stepRT-PCRmethodforthedetectionof porcineepidemicdiarrheavirus YuXuewu,WangShanshan,CaoMinghui,ZhaoFengju,YaoWei,CuiJixian, LiuKunyang,ChenYao,WeiShu,GuGuibo Abstract Theoutbreakofporcineepidemicdiarrhea(PED)intheglobalareahascausedsignificanteco⁃ ： nomiclossestotheswineindustryinrecentyears.Inordertodetectporcineepidemicdiarrheavirus (PEDV)specificallyandrapidly,aone-stepRT-PCRmethodwasestablished,whichprimerswerede⁃ signedaccordingtoNgeneconservedsequences.Thereactionsystemsandconditionswereoptimized. Theresultsshowthatthesensitivityoftheone-stepRT-PCRmethodwas 2016copies/μl.Thedetection resultsofporcinetransmissiblegastroenteritisvirus,porcinegroupArotavirus,porcinereproductiveand respiratorysyndromevirus,classicalswinefeverviruswereallnegative,withgoodspecificity.Theintra- assaycoefficientofvariationwas 1.14%~2.15%;andtheinter-assaycoefficietofvariationwas