细菌病的实验室诊断.ppt

细菌病的实验室诊断 细菌病的实验室诊断 初诊：根据流行病学、症状、病变等方面的疾病特征，做出初步诊断 通过实验室诊断，确定病原是否是细菌，病原菌的类型 细菌病实验室诊断的主要内容 病料的采集、保存和运送 病料采集遵循的原则 防止污染、无菌采样、适时采样、适当部位 病料采集方法（不同病料不同方法） 实质脏器、液体材料、其他病料 病料的保存和送检 病料中细菌检查方法 1.防止污染 4.适当部位 第二原则：一般采集正常无菌的部位 其他病料的采集 被毛或羽毛要取病变明显部位，并带毛根，放平皿。 细菌性病料的保存和送检 做好记录（畜主姓名、动物种类、地址、发病情况、欲检部位及检验项目、采集时间等） 二、 ★病料中细菌的检查方法（六类） 1、细菌的形态学检查 2、细菌的分离培养 3、细菌的生化试验 4、动物试验 5、血清学试验 6、分子生物学方法 ★ （一）形态学检查 光学显微镜检查 电子显微镜检查 1.不染色标本检查法 （一）形态学检查——1.光镜 单染色法 革兰氏染色结果 革兰氏染色结果 电子显微镜 药敏试验 分离培养方法 分离培养结果 分离培养结果 分离培养结果 （三）细菌的生化试验 糖类分解试验 糖分解（发酵）试验、甲基红试验、V-P试验等 蛋白质类分解试验 硫化氢试验、靛基质试验等 其他类型试验 触酶试验、尿素酶试验等 生化试验 （四）动物试验 将分离鉴定的细菌液接种到动物体内，观察动物发病情况，进一步确认病原 或者将可疑病料处理液接种敏感动物，以观察典型表现 （四）动物试验 —常用的接种途径 （五）血清学试验 鸡白痢检疫——全血平板凝集试验 （五）血清学试验 ——举例（鸡白痢检疫） （六）分子生物学方法 举例 大肠杆菌病的实验室诊断 大肠杆菌病实验室诊断 1. 剖检（采集病料） 2. 纤维素渗出物的涂片染色 3. 分离培养（普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板） 4. 培养物涂片G染色 生化试验 动物试验 6. 用单因子血清鉴定血清型 通常用平板培养基对细菌进行分离培养，根据细菌的培养特性选择适合目标菌生长培养基。 相同条件培养的相同培养基上，不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同。 有的细菌在鲜血琼脂平板上形成溶血环 也可采用选择培养基或鉴别培养基，以起到抑制杂菌或快速鉴别的效果，比如肠道杆菌科可选择麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂等。 不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同 有的细菌在鲜血培养基上有β-溶血现象 返回 鉴别培养基结果 伊红美蓝琼脂、麦康凯培养基大肠杆菌菌落 返回 根据细菌对不同底物的利用情况不同鉴别细菌的一系列试验 细菌的生化试验—糖类分解试验 糖发酵试验 MR试验 VP试验 细菌的生化试验—蛋白质类分解试验 靛基质试验 硫化氢试验 细菌的生化试验 检验时，根据可疑细菌的生化特性选择特定的一组生化试验，将结果与标准进行对比，以确定病原菌的种类 例：不同种沙门氏菌生化鉴定 注意：进行生化试验的细菌必须是纯培养物 鸡白痢沙门氏菌 鸡伤寒沙门氏菌 鼠伤寒沙门氏菌 返回 灌口 肌肉注射 腹腔注射 皮下注射 脑内接种 静脉注射 返回 抗原 + 抗体 抗原抗体复合物 可见反应 用已知抗体检测动物体内的病原菌 用已知的病原菌抗原检测动物血清中的抗体 临床诊断中，可用于细菌的血清分型、快速诊断或大群检疫。 例：鸡白痢的检疫 1、加一滴抗原 2、加一滴鸡的全血 3、将抗原和血液混匀 4、静置2min,观察结果 返回 分子生物学技术对病原菌的快速诊断和不能人工培养的细菌的探索发挥巨大的作用。 PCR技术、核酸分子杂交技术等 GO 二、细菌病实验室检查总结 病料采集 动物剖检 分离培养 触片染色 鉴别染色 纯培养 生化鉴定 动物试验 血清学鉴定 分子生物学检测 THANKS 大肠杆菌病纤维渗出物中的细菌 返回 大肠杆菌在麦康凯和伊红美蓝琼脂平板上形成的菌落 返回 * * 主讲：沈美艳 实验室诊断是在临床诊断的基础上进行的 （1）剖检场所：应选择便于消毒、不渗水的解剖地点，最好有专门的剖检场所和剖检台 。 （2） 剖检前，动物尸体应浸泡消毒。 （3）做好个人防护：剖检过程中，注意个人防护。 （4）剖检后的器械浸泡消毒后洗刷。 1.防止污染 1.防止污染 动物尸体焚烧炉 深埋（投入消毒药） （5）焚烧或深埋：剖检后动物尸体和病料焚烧灭菌或消毒深埋。 1.防止污染 垃圾 直接洗刷 处理不当会引起人和动物疫病的散播 动物或人的传染病 目的 防止病料被污染 措施 所用器械和器皿必须灭菌 点燃酒精灯 注意无菌操作 2.无菌采