水蛭素的舒血管作用及机制研究Study on the effect of hirudin on the vasodilator and its mechanism.pdfVIP

目 录 1 水蛭素的舒血管作用及机制研究……………………………1 1．1 中文摘要………………………………………………………1 1．2 英文摘要………………………………………………………5 1．3 前言……………………………………………………………10 1．4 材料与方法……………………………………………………12 1．5 结果……………………………………………………………19 1．6 讨论……………………………………………………………31 1．7 结论……………………………………………………………35 1．8 参考文献………………………………………………………36 1．9 英汉缩略词对照表……………………………………………38 2 致谢……………………………………………………………39 3 钙激活钾通道c【亚单位与高血压关系的研究(综述) …………………………………………………………………40 榧粼：雠：删碱～～嬲摘 要 ～～竖—掣鼍uZ0 calcium．aCtivated 目的：大电导钙激活钾通道(1arge．conductancepotassium 其具有电导值大、对钙离子敏感、电压依赖性等特性，通道通过负反馈机 制来控制平滑肌细胞肌源性张力和静息膜电位去极化程度，而BI≮a通道的 高电导性及在平滑肌细胞上的高密度表达决定了它对血管张力的调节。通 2000转染法在HEK 过脂质体Lipofiectamine 293上转染BKta0【亚单位，用浓 度为O．8 G418筛选，构建稳定表达的单克隆细胞系，在该表达细胞 m∥L 上可以记录到与天然细胞上电生理特性相似的Bk。电流。由此我们建立了 Bla0【单克隆HEIQ93细胞模型，并在其上研究药物对该通道的作用机制。 效，它是由医用水蛭唾液腺提取出的多种活性多肽组成，是一种丝氨酸蛋 白酶，具有阻止血小板聚集，抗血栓形成的作用。临床上主要用于治疗脑 中风，肿瘤等疾病，但活血作用在组织细胞和离子通道上鲜有报道，本实 验通过观察HIR对大鼠肠系膜血管动脉张力的作用及对HEK293上转染 的BI≮。通道作用研究，探讨其对血管作用及机制，为HIR应用于临床提 供更多实验依据。方法： (1)大鼠血管环实验：用3％戊巴比妥钠麻醉大 鼠，开腹取出肠系膜，分离出单根的肠系膜动脉，用眼科剪轻轻剔除血管 上的脂肪和结缔组织，并将动脉血管剪成2．3HHn的血管环，迅速放入含 钙的溶液I中，用两根银丝穿过剪好的小动脉环，确保两根银丝平行并固定 在DMT的换能器上，将挂好的血管与张力换能器、生物放大器与生理记 录仪连接，采用Chan7软件采集数据并进行分析，观察肠系膜血管的活性， 并观察mR对血管张力的影响以及其作用机制。(2)单通道膜片钳实验： 通过脂质体Lipof．eCt锄ine 用O．8 mg／mlG418筛选出稳定表达的单克隆细胞系进行膜片钳实验。其电 流信号通过膜片放大器放大，1Ⅺ乜低通进行滤波，再经12位加、D／A HIR对BKC。电流的作用。结果：1．HIR对大鼠肠系膜动脉血管环的作用： (1)用60mMKCl5min进行预收缩两次，将引起收缩差异小于20％的血 管用于后续实验。 NE去诱导血管收缩2min左右，加入25 (2)用O．8pM m∥L NE mM HIR，在舒张明显时加入5 引起血管环预收缩，再此基础上加入25mg／L 大鼠肠系膜血管的舒张作用有K+通道参与。 NE引起血管