【精选】大肠菌群检测作业标准书ok.docVIP

文件名称 大肠菌群检测作业标准书 页次 1/4 文件编号 YSMD/ZJ/ZY-01 版次 A/0 1.目的： 为保证原、辅料以及产品中的微生物指标之大肠菌群符合公司生产、客户以及国家的标准，确保产品不会对消费者健康造成影响；特制定本标准书。 2.范围 本标准书适用于对原、辅料以及半成品、成品的大肠菌群的检验 3.权责 检验员负责实验的全过程的操作 4.术语 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。显微镜载玻片酒精灯试管架5.2.1乳糖胆盐发酵管：按GB 4789.28-2003中4.9规定。 文件名称 大肠菌群检测作业标准书 页次 2/4 文件编号 YSMD/ZJ/ZY-01 版次 A/0 5.2.2伊红美蓝琼脂平板：按GB 4789.28-2003中4.25沥规定。5.2.3乳糖发酵管：按GB 4789.28-2003中4.10规定。5.2.4EC肉汤：按GB 4789.28-2003中4.11规定。5.2.5磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28-2003中3.22规定。5.2.6 0.85%生理盐水。5.2.7革兰氏染色液：按GB 4789.28-2003中2.2规定。5.3检验程序 大肠菌群检验程序如下： 检样 稀释 乳糖胆盐发酵管 36±1℃， 24±2h 不产气 产气 大肠菌群阴性 伊红美蓝琼脂平板 36±1℃， 18-24h 报告 革兰氏染色 乳糖发酵管 36±1℃， 24±2h 革兰氏阳性 革兰氏阴性无芽孢杆菌 产气 不产气 大肠菌群阴性 大肠菌群阴性 报告 大肠菌群阳性 5.4操作步骤 文件名称 大肠菌群检测作业标准书 页次 3/4 文件编号 YSMD/ZJ/ZY-01 版次 A/0 5.4.1检样稀释5.4.1.1以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水灭菌玻璃瓶内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。 固体检样最好用均质器，以8 000～10000r/min的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液。5.4.1.2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1∶100的稀释液。5.4.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。5.4.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。5.4.2乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。 5.4.3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。 5.4.4证实试验 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。5.4.5报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。 5.5粪大肠菌群(faecal coliform)用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见7.2条)转种于EC肉汤管内，置44.5±0.2水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)，培养24±2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36±1培养18～24