岗田酸联合顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响Effects of HiLo field acid combined with cisplatin on the proliferation and apoptosis of human lung adenocarcinoma A549 cells.pdfVIP

万方数据 万方数据 摘要 摘要 研究背景： 过去三十年，我国肺癌患者死亡率大幅度攀升。未来十年，我国肺癌病人数可能成为 世界第一，肺癌的预防和治疗刻不容缓。传统上肺癌的治疗分为：化学治疗、放射治疗和 外科治疗。其中，化疗为90%以上肺癌患者需接受的治疗方法，临床上顺铂是最常用的 化疗药物。近年以来，随着受体化疗耐药性的增强，铂类化疗效果不理想。故寻找高效、 低毒的药物来联合顺铂以增强化疗效果。 本文选取海洋藻毒素岗田酸与传统老药顺铂，探讨两药单独及联合对人肺腺癌A549 细胞增殖的影响，分析两药相互作用关系并初步探究诱导细胞凋亡的机制，以期为寻找临 床化疗调节剂提供新的理论依据。 研究方法： 1．MTT 法检测细胞增殖抑制率，分析顺铂、岗田酸及两药联合对A549 细胞增殖的影响。 金正均公式分析岗田酸与顺铂两药在抑制A549细胞增殖上的相互关系。 2．台盼蓝拒染实验进行活细胞数量的测定，透射电镜观察、倒置相差显微镜观察、Giemsa 染色法、吖啶橙染色法观察药物对A549细胞形态学影响。 3．琼脂糖凝胶电泳法、考马斯亮蓝G250染色法检测药物对A549细胞遗传物质DNA 和 胞内蛋白的影响。 4．荧光分光光度法测定ROS含量和线粒体去极化，倒置相差荧光显微镜观察线粒体膜电 2+ 位变化，MTT 检测外源Ca 对药物处理下A549 细胞存活率的影响。 研究结果： 1. MTT 实验结果显示：一定浓度范围内，岗田酸和顺铂对A549 细胞的增殖均存在抑制 作用，抑制作用随着时间延长和剂量升高而加强。双药联合对细胞增殖产生抑制，抑 制效果好于单药作用，联合作用也呈现出时间和剂量依赖性抑制。金正均公式计算结 果显示：岗田酸联合顺铂处理A549 细胞，岗田酸与顺铂表现出相加或协同的作用效 果。 2. 台盼蓝拒染实验结果显示：经20ng/ml 岗田酸、1µg/ml 顺铂、20ng/ml 岗田酸+1µg/ml 顺铂处理A549 细胞后，活细胞数目呈现时间依赖性减少，双药联合作用效果明显好 于单药。形态学观察结果显示：20ng/ml 岗田酸、1µg/ml 顺铂、20ng/ml 岗田酸+1µg/ml 顺铂处理A549 细胞48h 后，细胞间接触消失，细胞形态变圆，细胞体积缩小，细胞 内染色质凝集，细胞空泡化严重，细胞周围密布凋亡小体、部分细胞破碎解体，双药 联合细胞凋亡现象比单药更严重。 I 万方数据 摘要 3. 琼脂糖凝胶电泳结果显示：20ng/ml 岗田酸、1µg/ml 顺铂、20ng/ml 岗田酸+1µg/ml 顺 铂处理A549 细胞48h 后，DNA 受损出现阶梯状光亮条带，联合处理组DNA 条带更 长、更亮，说明药物作用下A549 细胞发生凋亡。考马斯亮蓝G250 染色结果显示：药 物作用下A549 细胞内总蛋白含量降低，药物联合处理组蛋白含量是低于顺铂处理组 和岗田酸处理组，联合处理组与对照相比具有显著性差异。 2+ 4. 药物引起A549 细胞凋亡可能是通过ROS、Ca 、线粒体参与的胞内信号通路。实验 2+ 结果显示：药物作用下细胞内ROS含量升高，添加外源Ca 能加剧细胞凋亡，线粒体 膜电位有显著性的变化。 关键词：岗田酸，顺铂，A549 细胞，联合，细胞增殖，细胞凋亡 II 万方数据 Abstract