羊栖菜多糖对内毒素诱导的大鼠肝星状细胞的影响-内科学(消化专业)专业毕业论文.pdfVIP

温州医学院硕士学位论文 羊栖菜多糖对内毒素诱导的大鼠肝星状细胞的影响 中文摘要 目的 stellate 1．建立较为全面反映体外培养大鼠肝星状细胞T6细胞株(hepatic cel卜T6 strains，HSC—T6)活化效应的细胞模型 Fusiforme 2．观察不同浓度羊栖菜多糖(Sargassum 对内毒素(LPS)诱导的肝星状细胞HSC—T6的增殖活化、氧化损伤及凋亡的影 响，并探讨其抗纤维化的机制。 方法 T6，分别作用12，24，48小时后，四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖 活性，筛选出有显著差异的药物浓度和作用时间建立模型。 (1．Oug／m1)处理细胞48小时后，MTT比色法检测细胞增殖活性。 3．经上述分组及处理，收集细胞，AnnexinV—FITC标记法检测细胞的凋亡。 4．经上述分组及处理，收集上清液及细胞，硫代巴比妥酸法(thibabituric acid，TBA)测定细胞内的丙二醛(Maleic 酶比色法测定上清液中的超氧化物岐化酶(Superoxidedismutase，SOD)活性。 5．经上述分组及处理，收集细胞提取RNA，逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检 测凋亡调控基因FaslmRNA的表达。 6．6．经上述分组及处理，收集细胞提取蛋白，Westernblot法检测a-SMA (43KDa)的表达。 结果 T6，作用48h后，促进细胞增殖活性的作用在0．1～1．Oug／ml浓度范围内呈剂 立模型。 2．SFPS不同浓度(O，25，50，100，200，400，800 细胞48小时后，抑制细胞增殖活性的作用在25～lOOug／ml浓度范围内呈剂量 相关性，lOOug／ml浓度组效果最明显。随着计量的增加，细胞出现坏死变形 较多，因此设置药物浓度为O，25，50，lOOug／ml。设置分组为A组：空白对 LPS+SFPS25 照组；B组：LPSl．Oumol／L组；C组：1．Oumol／Lug／ml组；D 组：1．Oumol／LLPS+SFPS50 LPS+SFPSl00 ug／ml组；E组：1．Oumol／L ug／ml组。 3．Annexin 3．6)％，PO．05，SFPS(25，50，100ug／m1)组可以不同程度诱导HSC发生凋 亡，并且呈计量相关性(均P(0．05) 2．45±0．14，D组2。19±0．12E组1．79±0．10；SOD活力(U／m1)：A组 E组 36．33±2．39。模型组能增加MDA的分泌减少SOD的分泌，与模型组相比相比， 4 温州医学院硕士学位论文 SFPS(25，50，100 P(0．05) C：1．31±0．08，D：1．43±0．02，E：1．70±0．02， F=215．23，PO．01．模型组能 增加FaslmRNA的表达，与模型组相比相比，SFPS(25，50，100ug／m1)组可以不 同程度增加FaslmRNA的表达(均P(0．05) 6．Western blot法检测a—SMA的表达各组灰度比值分别为A：0．38±1．12， 诱导的肝星状细胞分泌的a—SMA表达受到抑制并呈剂量依赖性(P0．05)。 结论：LPS可明显促进体外培养HSC—T6的增殖，SFPS能明显抑制其增殖及活化 并诱导其凋亡，凋亡途径可能与FAS／FASL通路有关，这可能是羊牺菜多糖抗肝 纤维化的作用机制之一 关键词羊栖菜多糖；肝星状细胞；内毒素；凋亡；FAS／FASL 5