高效液相色谱法同时检测生物样品中利多卡因与MEGX.docVIP

高效液相色谱法同时检测生物样品中利多卡因与MEGX 　　摘要：目的建立生物样品中同时测定利多卡因及其代谢产物单乙基甘氨酰二甲苯胺（MEGX）的高效液相色谱分析方法。方法待测生物样品血液或组织脏器中加入内标物普鲁卡因，酸化，碱化后，用乙醚提取两次，挥干，定容，用保留时间定性，内标法、工作曲线法进行定量。结果心血和肝脏中利多卡因液相色谱检测的回归方程分别为Y=0.217X+0.019和Y=0.214X+0.113，相关系数分别为0.996和0.988，线性检测范围均为（0.2～100）μg/mL（μg/g）、最低检出浓度分别为0.05μg/mL；心血和肝脏中MEGX液相色谱检测的回归方程分别为Y=0.514X+0.033和Y=0.440X+0.292，相关系数分别为0.995和0.993，线性检测范围均为（0.2～20）μg/mL、最低检出浓度分别为0.05μg/mL。心血利多卡因及MEGX含量分别为（14.50±1.64）μg/mL和（1.64±0.22）μg/mL，肝脏利多卡因及MEGX含量分别为（14.90±1.19）μg/mg和（2.53±0.36）μg/mg。结论建立了生物样品中同时测定利多卡因及MEGX的HPLC分析方法，所建方法简便、灵敏、重现性好，可用于利多卡因中毒的快速诊断和利多卡因麻醉意外的法医学鉴定。 关键词：利多卡因；单乙基甘氨酰二甲苯胺；高效液相色谱法；生物检材 中图分类号：R969.1文献标识码：A文章编号2012 利多卡因（Lidocaine）是椎管内麻醉常用的酰胺类药物，由于椎管内结构特殊等原因[1，2]，由利多卡因所引起麻醉意外等人身伤亡案例[35]时有发生。利多卡因入体后大部分经肝药酶（细胞色素P450）代谢为单乙基甘氨酰二甲苯胺（MEGX），MEGX影响着利多卡因的疗效及毒性[6，7]，同时检测利多卡因和MEGX含量对多卡因麻醉意外的法医学鉴定意义重大。本实验建立生物检材中利多卡因和MEGXA的高效液相色谱法（HPLC）检测方法，并应用于利多卡因麻醉意外法医毒物动力学研究。 1材料与方法 1.1试剂及仪器盐酸利多卡因注射液（2%，国药准字购于上海复星朝晖药业有限公司，利多卡因标准品购自公安部物证鉴定中心（Lot：SW1083），MEGX标准品购自公安部物证鉴定中心（Lot：6938292），普鲁卡因标准品购自公安部物证鉴定中心，甲醇为TEDIA公司生产。除甲醇为色谱纯，其他均为分析纯。 日本岛津LC20AT高效液相色谱仪，Dikma迪马科技C18二代色谱柱，SPD20A紫外检测器，N3000色谱工作站。 1.2仪器分析条件DikmaC18柱（迪马科技5μm；250mm×4.6mm）；柱温25℃；流动相：甲醇：磷酸缓冲液（15mmol/L，pH=3）=30：70；检测波长229nm；流速1mL/min；进样量20μL；工作站：N3000色谱工作站。 1.3给药方案和样品采集健康本地犬9只，蛛网膜下腔注射组（6只）和对照组（3只）。蛛网膜下腔注射组：蛛网膜下腔穿刺后，于5min内向蛛网膜下腔注入LD50（15mg/kg）剂量利多卡因；对照组：以等体积生理盐水代替利多卡因，其余处理同蛛网膜下腔注射组。所有实验犬于死后即刻提取心血、肝脏待检。 1.4心血和肝脏样品处理与分析待测固性样品1g或血液1mL，加蒸馏水2mL，固性样品超声匀浆3min，加内标普鲁卡因50μg，振荡5min；10%HCl调酸pH=2～3，振荡5min，3000r/min离心10min，提取上清液；上清液用10%NaOH调碱pH=11～12，震荡2min，加乙醚5mL，振荡15min，3000r/min离心10min，取上层乙醚液；乙醚5mL重复提取一次；合并乙醚液，40℃水浴挥干。残渣用500μL甲醇定容，通过针筒式滤膜过滤器（孔径0.45μm）过膜后，按上述仪器条件进样20μL，液相色谱工作内标工作曲线法定量分析样品中利多卡因及MEGX。 2结果 3讨论 据相关文献报道，同时检测利多卡因和MEGX常使用GC[8]和HPLC[9]法。由于MEGX的化学性质，GC和GC/MS在检测MEGX时，必须先进行衍生化处理，才能进一步检测；而所报道HPLC法多采用乙腈等高成本流动相，并且检材前处理发放繁琐[10]。本实验建立同时检测生物检材中利多卡因和MEGX的HPLC方法，该方法在选定条件下利多卡因、MEGX、普鲁卡因（内标）能够与其他杂质峰良好分离（普鲁卡因Rt=4.03min，MEGXRt=10.17min，利多卡因Rt=13.228min，分离度Rs2），峰形对称，分离效果好，在较高浓度范围内有较好的线性