地中海贫血相关知识【可编辑】.docVIP

β—珠蛋白基因有多少个外显子？mRNA序列与编码序列之间有何关系？ 答：（1）人血红蛋白β珠蛋白基因有3个外显子和2个内含子,全长约1700个碱基对,编码146个氨基酸。 （2）DNA双连中按碱基配对规律能指引转录生成RNA的一股单链，称为模版链，相对的另一股单链是编码链。转录产物若是mRNA,,则可用作翻译模版，按遗传密码决定氨基酸的序列，因此，模版链既与编码链互补，又与mRNA互补，mRNA的碱基序列除用U代替T以外，与编码链是一致的。 β—地中海贫血的分子基础是什么？中国人群中有哪5种最常见的突变？这些突变对该基因的表达有何影响？ 答： 绝大多数的β地中海贫血是由于β基因突变所造成的。至今为止只发现十几种缺失型的β型地中海贫血。β珠蛋白基因的突变可能发生在基因中的编码序列，也可能发生在基因5’端转录调控序列、内含子碱基信号序列、3’端多聚腺苷酸附加信号序列等非编码序列。 β地中海贫血至今已发现170多种突变类型，其中10多种为缺失型，其余均为点突变。我国发现报道27种。 点突变 绝大多数β地中海贫血是由于β基因发生点突变所致，突变涉及基因内及侧翼表达序列的各个环节。主要类型有5种。 编码区的无义突变、移码突变和起始密码突变 这些突变使生成的mRNA的稳定性降低或形成无功能的mRNA，从而不能合成正常的β珠蛋白链，多数产生β0地贫；少数为β+地贫。例如：无义突变密码子17（A→T）、43（G→T）都产生β0地贫。移码突变密码子41|42（-TCCTT），密码子71|72（+A）产生的β0地贫；以及起始密码子突变ATG→AGG导致的β0都属于这类，见于中国人。 非编码区 IVS-1和IVS-2突变 影响前mRNA剪接等加工过程不能准确进行，形成异常的mRNA，导致β0或β+地贫。例如IVS-1的1位G→T为RNA拼接处改变；中国人中常见的IVS-2的654位，为内含子中由于碱基置换形成了一个新的裂解信号，影响正常位点的剪接，产生异常的mR2NA；还有一种是内含子中剪接位点的通用顺序上的同义突变，从而激活内含子或外显子中隐藏裂解位点（CSS），如IVS-1的5位（G→C）。CSS即DNA的一段顺序在点突变后可形成剪切识别顺序（CCTATTGGT的第七个碱基G变成A，则产生新的切点，CCTATTAG↓T） 影响转录的突变 这类突变主要集中于起始位点上游的启动子TATA框，使转录效率降低mRNA生成量减少而产生β+地贫。中国人中的-29A→C、-28A→C都属于这一类。 RNA裂解部位缺陷 这类突变是由于异常的RNA加帽部位和多聚腺苷酸化信号的突变，从而影响在RNA转录后不能准确裂解，产生不稳定的mRNA，使得正常β链生成减少，导致β+地贫。例如，在mRNA加帽部位发生A→C颠换，引起β+地贫，又如，多聚腺苷酸化信号AATAAA→AACAAA，引起β+地贫。 编码区的外显子突变引起剪接作用的改变 这类突变是由于编码区的单碱基突变激活邻近的隐藏裂解信号，影响IVS正常位点的剪接，产生异常的mRNA。如东南亚常见的Hb E，是一种轻型的β地贫，其原因是当β链26位密码子发生G→A错义突变时，其相邻的裂解信号被激活，生成异常mRNA，产生Hb E 类p珠蛋白基因缺失按类p珠蛋白基因簇缺失长短大致可分为5种，即β0、δβ、γδβ地中海贫血、HPFH及融合基因，单纯由于p基因缺失引起的β0地中海贫血是罕见的。 如何检测β—地中海贫血？寡核苷酸探针杂交、反向点杂交、等位基因特异聚合酶链反应，限制性内切酶分析检测方法的生化基础分别是什么？ 答：四种检测方法，即反向点杂交，限制酶酶谱分析，寡核苷酸探针杂交，等位基因特异聚合酶链反应。 (1)反向点杂交 又称DNA点杂交，把患者DNA直接点加在硝酸纤维膜上，与同位素标记的珠蛋白基因探针作分子杂交。根据杂交斑点的放射性强度，即能鉴定出珠蛋白基因是否缺失。本法由作者实验室建立，具有快速简便而灵敏的优点，已成为血红蛋白病诊断的重要技术。 （2）限制酶酶谱分析(restriction map analysis)s患者DNA先经限制性内切酶消化，电泳分离，再与珠蛋白基因探针作Southern 7杂交和放射自显影，即可得限制性内切酶酶谱。根据酶谱上是否存在特异的DNA区带和DNA区带的长短，可以诊断出珠蛋白基因是否缺失和缺失多少。 （3)寡核苷酸探针杂交：用人工合成和突变基因互补的寡核苷酸(oligonucleotide)作探针与患者DNA杂交，根据杂交与否，便能测知是否存在相应的β地贫突变基因或异常血红蛋白基因，这是80年代中期开始应用的一种遗传病基因诊断技术，由于本法灵敏、简便，能直接检测出基因突变类型，具有重要价值。 （4）等位基因特异聚合酶链反应