一株产丙烯腈水合酶菌株的研究.doc

一株产丙烯腈水合酶菌株的研究3 张云桦 方仁萍 沈寅初 (化工部上海生物化工研究中心, 上海 200032) 摘 要 从山东省泰山地区土壤中分离到一株能产生丙烯腈水合酶的微生物菌株 862 163, 经分类学特征鉴定可归属于诺卡氏菌属, 其培养特征、生理生化特征及产酶活性 等方面与已报导的诺卡氏菌有差别, 暂定名为 N oca rd ia sp. 862163。 关键词: 诺卡氏菌2862163, 腈水合酶, 丙烯腈, 丙烯酰胺 从山东省泰山土壤中分离到一株编号为 862163 的 菌 株, 能 使 丙 烯 腈 转 化 为 丙 烯 酰 胺, 经过分离纯鉴定, 该菌株属诺卡氏菌, 能 产生可催化丙烯腈水合成丙烯酰胺的腈水合 酶, 本文报导 862163 菌株的生物学鉴定及其 对丙烯腈有关酶活性的研究结果。 结果 2 2. 1 862163 菌株的细胞形态: 862163 菌株 革 兰 氏 染 色 阳 性, 不 抗 酸, 在培养不同时期的镜检照片如下: 材料和方法 1 1. 1 菌种: 862163 菌株: 从山东省泰???土壤中分离 获得。 1. 2 培养基: ( 1 ) 斜 面 培 养 基: 葡 萄 糖 1% , 酵 母 膏 0. 3% , K 2H PO 4 0. 2% , N aC l 0. 1% , M gSO 4 ·7H 2O 0. 02% , 琼脂 1. 5% 。 (2) 平板培养基: 同斜面培养基。 ( 3 ) 摇 瓶 培 养 基: 糊 精 0. 5% , 酵 母 膏 0. 2% , 甘 油 0. 5% , N aC l 0. 1% , K 2H PO 4 0. 2% ,M gSO 4 ·7H 2O 0. 02% 。 1. 3 酶活力测定方法: 吸 取 5 m l 发 酵 液, 调 节 pH 至 7. 0, 加 0. 1 m l 丙烯腈, 于 28℃振盐水浴中反应 1 h , 加入0. 2 m l 4 N 盐酸中止反应, 再将 pH 调 回至 7. 0, 用气相色谱法测定丙烯酰胺的含 量。 1. 4 鉴定方法: 参见文献1 。 5 h 10 h 3 国家科委“七五”、“八五”攻关项目的部份工作 第一作者简介: 张云桦, 女, 1960 年生, 工程师。  862163 菌株液体培养早期细胞形态在 电子显微镜 ( 放大 6150 倍) 下观察到如下照 片。 15 h 862163 菌株的细胞形态在发育过程中, 初期 有 明 显 的 分 枝 菌 丝, 大 小 为 0. 6～ 0. 8 Λm ×1. 6～ 14 Λm , 13 h 后开始断裂, 20 h 后 呈大小整齐的短杆状, 呈链条堆状排列, 48 h 测得菌体大小为 1. 14 Λm ×1. 76 Λm。 2. 2 培养特征 862163 菌株在下列培养基上的 培 养 特 征如下表: 20 h 培养基 培养特征 菌落隆起, 无气生菌丝, 呈不规则圆 形, 表面光滑, 有光泽, 呈粉红色至桔 红色, 随培养时间而加深。 无可溶性 色素。 营养琼脂 马铃薯浸 汁琼脂及 马铃薯块 生长良好, 表面湿润, 呈粘液状, 色泽 从淡桔红色至灰桔红色, 无可溶性色 素。 25 h 生 长 旺 盛, 清, 桔 红 色, 絮 状 菌 膜 下 沉。 营养肉汤 天门冬酰 胺2葡萄 糖琼脂 生长中等, 菌落平坦, 表面湿润, 呈粘 液状, 菌落色泽呈桔红色, 无可溶性 色素。 2. 3 生理生化性质: 862163 菌株的生理生化性质如下表: 30 h  2. 5 氮源利用: 862163 菌株对各种氮源的利用 状 况 如 下表: 需氧试验 好氧 O F 试验 石蕊牛奶 氧化、产酸能力弱 产龄、不凝固、 不液化 + - (N H 4 ) 2 SO 4 + 丙烯腈 ( 0. 5% ) ± + + + (1% ) 丙烯酰胺 (0. 5% ) (1% ) - + + N aN O 3 尿素 谷氨酸钠 硝酸还原 厌氧硝酸 盐产气 2. 6 胞壁分析: 细胞壁分析结果表明构成 862163 菌株 细胞壁成份的糖以阿拉伯糖和半乳糖为主, 构成细胞壁的氨基酸组份中也含有诺卡氏菌 细胞壁特有的氨基酸成份 2, 62二氨基庚二 酸。 从上述结果可以看出 862163 菌株符合 诺卡氏菌属的特征。 V p 试验m R - - - V p 吲哚生成 H 2 S 产生 淀粉水解 酪素水解 - - 明胶液化 H 2O 2 酶 氧化酶 抗酸性 纤维素水解 生长 pH 范围 生长温度范围 10% 脱脂牛奶 72℃15 m in 色素形成 Tw een 分解 (40) (60) (80) 耐盐浓度 - + - 862163 菌 株 有 关 丙 烯