23丁二醇氧化还原酶基因敲除对克氏肺炎杆菌合成13丙二醇的影响研究.pdfVIP

2,3-丁二醇氧化还原酶基因敲除对克氏肺炎杆菌合成1,3- 丙二醇的影响 吴哲，王凤寰，田平芳，谭天伟* 北京化工大学生命科学与技术学院; 北京化工大学北京市生物加工过程重点实验室，北京，100029 投稿范围：12．基因工程与组织工程 摘要：利用Klebsiella pneumoniae 微氧发酵甘油生产 1,3-丙二醇时,一部分甘油通过氧化代谢途径大量 合成副产物 2,3-丁二醇,降低了 1,3-丙二醇的得率。2,3-丁二醇的形成不仅消耗了大量甘油，还将还原型 辅酶NADH 氧化为NAD+ ，降低了同为NADH 依赖型的1,3-丙二醇合成途径的效率。在下游的分离阶段，2,3- 丁二醇与1,3-丙二醇性质接近，影响到1,3-丙二醇的分离过程和最终纯度。 2,3-丁二醇氧化还原酶（AR）是2,3-丁二醇合成途径的关键酶之一，编码此酶的是budC 基因。本文以2,3-丁二醇氧化还原酶为改造目标，以Klebsiella pneumoniae 为宿主，通过同源重组技术 在Klebsiella pneumoniae 的budC 基因中地插入了带有启动子的四环素抗性基因（Tet），经抗性筛选和 基因水平鉴定，得到budC 基因敲除的重组菌。通过摇瓶发酵，并研究了这株重组菌的菌体干重，结果表明 重组菌的菌体生长受到明显抑制，细胞干重降低 34.8%。通过液相色谱测量发酵液成分，结果显示，2,3- 丁二醇合成浓度比出发菌株大大降低。摇瓶中甘油初始浓度是 20 g/L，重组菌合成的 1,3-PD 浓度达到 -1 10.87gL ，甘油转化率达到0.6577mol/mol，与出发菌种的最好的发酵结果相比，产量提高20.78%。因此， 敲除2,3-丁二醇氧化还原酶基因是一种提高1,3-丙二醇产量，降低分离成本的有效方法。 关键词：2,3-丁二醇氧化还原酶；1,3-丙二醇；2,3-丁二醇；克氏肺炎杆菌 中图分类号:Q78 文献标识码:A Influence of Inactivation of acetoin reductase on the 1,3-propanediol production by Klebsiella pneumoniae Wu Zhe1,2, Wang Fenghuan1,2, Tian Pingfang1,2, Tan Tianwei1,2* （1.College of Life Science and Technology; 2.Beijing Key Laboratory of Bioprocess; Beijing University of Chemical Technology; Beijing 100029, Beijing, China ） Abstract ：Production of 1,3-propanediol (1,3-PD) from glycerol by Klebsiella pneumoniae is restrained by butanediol formation. Three enzymes are involved in the production of 1 mol of butanediol from 2 mol of pyruvate: 联系人：谭天伟，男，教授，010twtan@mail.buct.edu.cn。 第一作者：吴哲（1984—），女，博士研究生。 基金项目：国家重点基础研究发展规划(973 项目) (2007CB707804) 国家“ 863”高技术研究与发展计划资助项目(2006AA020103). a-acetolactate synthetase (ALS), a-acetolactate decarboxylase (ALDC), and acetoin reductase (AR).They are encoded by the genes budA (ALDC), budB (ALS), and budC (AR), which are organized in an operon. The last step in the formation of butanediol from pyruvate is catalyzed by acetoin reductase (AR), an step that slightly affacts the growth of the Klebsiella