肿瘤模型专题肿瘤模型专题.doc

肿瘤模型专题 最新的药效学指导原则要求化药临床前进行至少5种人源肿瘤的体内抗癌活性评价，以确定药效及抗瘤谱。瘤株对药物的敏感性通过体外筛选以说明，而体内评价更大程度上是考虑药物经体内吸收、分布、代谢之后的活性，由于目前的肿瘤模型多采用皮下接种，并不能完全反映药物的组织分布对其影响，所以感觉这种要求就显得不是很必要体内的敏感性不是考虑吸收分布代谢的影响，一些样品，体外活性都是不错的，体内甚至是瘤内直接注射给到很高剂量都没有效果，肿瘤细胞在体内和体外的生存环境差别很大，体外模拟的生存环境完全不能体现出体内的状态。皮下接种是一个目前能找到的最好的权宜之计了，实际上，SFDA明确表示，鼓励原位肿瘤模型，但是由于技术的原因，很多瘤株都无法实现。而皮下模型有它的一系列优点：稳定，便于观察，易于构建，易于控制等等，能够在一定程度上反映药物经过体内过程的疗效，所以目前只能用它来进行评价。实际上原位肿瘤模型仍然不能很好的反映临床肿瘤的特点，目前能够预见得到最好的模型应该是经过基因修饰（转基因等）的能够集中比较均匀的自发模型，这才是和临床最接近的肿瘤模型。但是目前的经过基因修饰的自发肿瘤模型种类很少，而且可控制性差，周期长，所以还要经过很长时间的改善才能大规模的应用。常规的肿瘤细胞株接种后如果不能成瘤，细胞悬液就会被动物吸收瘤体积可用游标卡尺量最长径（a)和最短径（b），体积计算公式：V=πab^2/6,每2-3天测一次体积=宽^2*长/2的公式计算肿瘤体积抑瘤率=（对照组-治疗组）/对照组*100%tumor size = width2 · length · 0.52).； Πab2/6；关于肿瘤体积的计算：3.1415926....../6约等于/2。如果想做得讲究一点，应该用RTV计算肿瘤体积： RTV（某日某老鼠的相对肿瘤体积）=TV(测量当天该老鼠的肿瘤体积）/TV（分组当天该老鼠的肿瘤体积）*100在此基础上进行平均值SD等数据的计算是否必须称重小鼠的胸腺和脾脏超过7天的腹水再传代就很容易出现血性动物的周龄也不要太大，6周左右。传代次数太多也很容易出现血性腹水血性腹水可以离心后加0.17 N的NH4CL溶液破红细胞，然后精确一些的控制条件（接种量，传代时间，动物周龄等）传几代，很多情况下再传一两代后会有不血性的种鼠出现，然后用这只种鼠的腹水继续传代小鼠肿瘤剥瘤子是一个的过程，但是可以一定程度上的改善一下：接种的时候要精确控制接种在皮下，靠皮内会与皮肤强烈粘连，靠肌肉会与肌肉强烈粘连，而且不要太靠腋窝里面，可以往尾部靠一些也可以稍微的往背部靠一点，不要往腹部靠，容易使肿瘤被垫料磨烂。LD50是毒理中的半数致死量，ED50是体外试验中的半数有效量，一般体内实验没有类似的指标，如果比较几个类似物的药效还是做量效曲线比较好。剂量设置应该按照LD10(10%致死剂量，也叫最大耐受剂量）来分组，一般分别采用 1/2 LD10, 1/4 LD10, 1/7 LD10 或 1/10 LD,但最大剂量不得超过LD10。这里面还考虑ED 50，LD10与ED50的剂量相差越大越好。 用LD50作为标准设置剂量是不现实的，因为动物实验是不可能允许10%以上动物死亡的。说到疗效的比较，如只是发文章，比较不同基团之间可能对母体抑瘤率的影响，一般做做体外试验，比一比大家的IC50就好了，不太做体内。如是真正的筛药，我个人有些观点：这个不是孤立起来看某个或者某几个剂量下谁比谁的抑瘤率高。主要要看谁更具有可开发性。首先，要考虑它的毒性以及治疗窗口的大小，通俗的说，就是这个要在发挥疗效的剂量下，毒性是否大？比如A药，10mg抑瘤率有50%，但是体重下降了20%;而B药，10mg的时候根本无效，30mg的时候有40%的抑瘤率，60mg的时候抑瘤率高达80%，而且体重几乎没有下降，这个时候A药与B药如何比较？特别如果是公司筛选新药，还要考虑成本，病人可接受度（动物上的有效剂量换算到人一天要吃2斤，这种药也是不现实的），制剂，工艺等等方面。如果单纯从药理的角度给出答案，至少要考虑毒性和剂量限制的问题。关于剂量选择，LD50几分之一是一种比较通用的方法，目前相对更合理一些的剂量选择是做一个简单的多次给药的毒理试验来确定剂量，我们一般会连续给药一周，然后再观察一周，这样摸出来的最大剂量可以直接用于药效试验，然后其他的剂量都在此剂量的基础上往下减。说到给药疗程，一般初筛的药物都是连续天天给药，qd。但是给药途径，特别是i.v与i.p的选择，我们都是先做一个简单的PK试验考察一下，再确定，特别是如果PK试验的结果显示，血药浓度甚至达不到体外IC50的浓度，那么是否进行体内试验，就有待商榷了。连续i.p，小鼠的皮肤有时候会变厚，你可以换一边给药。动物选择: KM小鼠,裸鼠,C57 等