低分子肝素脂质体的研讨.pdfVIP

在65℃以下时酶活基本未损失，性质较稳定，当沮度继续上升时醉活急剧下降，主要由于酶蛋白发生了 变性反应(图略)。 2.4 海藻搪酶的pH稳定性 海藻橄陇在pH4一9间稳定(图略)。 2.5 金属离子对海燕精酶的作用 C了十，Fee十，Coll对醉活力基本没有影响;而Ca十，M矛+可强烈促进酪活力增加。据研究报道，中性海 藻箱醉位于胞浆内，在酶N端区存在一类似于Ca2+结合位点的序列，其可被CAMP/ATP信号传导系统中一 蛋白徽醉醉酸化而活化。此活化过程依赖于Ca及Mn,，而且。2+也可稳定已活化的海燕特醉，从而增 加了酶的活性。(图略) 2.6 化学试剂对海藻抢酶的作用 践q及较低浓度EDTA对酶活影响较小，而抓仿可强烈抑制醉活性(图略)。(参考文献略) 低分子肝素脂质体的研究 祖光喜 邹立家 张天民 (山东医倪大学药学院 济南 250012) 低分子肝素(lowmolecularweightheparin,LMWH)是由肝素经降解得到的低分子量的肝素片段或经分 级法得到的低分子量肝素组分，相对分子质量一般为3000-8000，可用于防治深部静脉血栓、肺栓塞、播散 性血管内凝血等疾病。为适应经皮给药的僻要，我们研制了低分子肝家的透皮吸收脂质体喷胶，并进行了动 物体内药效学研究。本文对低分子肝素脂质体的有关性质进行了研究口 1材料与方法 1.1试剂 肝素钠标准品(中国药品生物制品检定所)，肝素钠(济南长白山药化有限公司)，前体 空〔白)脂 质体(德国Nattermann公司);其他试剂均为国产分析纯或化学纯。 1.2 仪器 JEM-120EX透射电子显微镜(日本);SS-14A型框式超过滤器(上海瑞丽分离仪器厂);表面 电位粒径仪 上〔海市检测技术所检测仪器厂);U2000紫外分光光度计(日本日立公司)。 1.3 低分子肝素的制备及检侧按文献的方法。 1.4低分子肝素脂质体的制备 将低分子肝素加人到适量pH7.0磷酸盐缓冲液中使成糊状，加人前体脂 质体，研磨15min，放置15min，再加人维生素E,研磨均匀。将尼泊金乙醋溶解于丙二醉中，在不断搅拌下将 其级慢加人到上述含低分子肝素的混合物中，再加pH7.0礴酸盐缓冲液至100g,搅拌均匀即得。其中药物 含量为3%，磷脂为10%0 1.5低分子肝素脂质体颐粒的形态观察 取样品适量，稀释，滴加3%礴钨酸染色液，混匀，用铜网蕊取混 合液，干操，在透射电镜下观察脂质体顺粒的形态。 1.6 低分子肝素脂质体顺粒表面电荷种类及电位的测定 参照文献，取适量样品稀释，注人表面电位粒径 仪的密封电泳池中测定。 1.7低分子肝素脂质体包封率的测定 ①标准曲线的绘制 采用天青A法[51侧定低分子肝素的含量(效 价)。先将低分子肝素配成100u/ml水溶液，再稀释成0.5,1,2,3,4,5u/ml水溶液。于5m1试管中依次加人 上述标准液1ml，再加人pH8.6巴比妥缓冲液1ml,0.1%西黄爹胶溶液lml以及天青A试液Iml，再加水至 5ml，振摇均匀，于505nm波长处侧定吸收度。以吸收度对相应浓度回归计算，得标准曲线:A=一0.022+ 0.146C,r=0.9999②低分子肝素对超滤膜的通透性 取50,100,150u/ml的水溶液，注人超滤器中进行超 滤(超滤膜分子量截流值为50000)，取滤液测定其中低分子肝素的含量。通透百分率二滤液药物浓度/原始 药物浓度x100%o③脂质体对低分子肝素的吸附 取空白脂质体混悬液2ml，加人含有药物2400u的18m1 蒸谙水中，混合均匀.注人超滤器中进行超撼.取滤液测定其中低分子肝素的含量。吸咐百分率=(投人药物 量一滤液药物量》投人药物量x100%o 脂质体表现重量包封率的测定 取含药脂质体混悬液2m1(含药 量2400u)，加人燕馏水18ml,混匀，注人超滤器中进行超滤，取滤液测定其中低分子肝素的含f。表现重量 966 玉 一引丫丁 包封率=(投人药物量一撼液药物量)/投人药物(x100%,重量包封率二表现重f包封率一吸附百分率。 1.8低分子肝素脂质体稳定性的考寮 ①脂质体顺粒形态观察 将脂质体混悬液于4℃放$3个月后取 样电镜下观察脂质体颐粒的形态。②脂质体渗漏率的测定 将低分子肝索脂质体混悬液分别于4,15,25r- 放里3个月后，取样测定其包封率Q贮包，按下式计算渗漏率QA=(Q耳包-Q贮包)/Q甲包x100%, 2 结 果 2.1所制得低分子肝素