子宫内膜异位症动物模型再评价.docx

子宫内膜异位症动物模型再评价子宫内膜异位症（内异症）是指有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆黏膜以外的身体其他部位的疾病。是一种激素依赖性、出血性、炎症性、遗传性疾病，临床症状可表现为盆腔痛、月经失调、不孕、盆腔包块等[ 1]。自1860年首次报道该病以来，其发病机理至今尚未完全明了，它仍是令妇科专家们“迷惑的疾病”。根据近年来的研究显示，内分泌异常改变有利于子宫内膜移位种植，未成熟卵泡黄素化可能是发生内异症的病因之一。患者常伴有细胞和体液免疫功能的异常，有部分免疫球蛋白与补体的变化及细胞免疫反应异常，患者的血中与腹腔液中可发现多种自身抗体。加强对本病的基础研究，特别是建立理想的动物模型模拟人类内异症，以便进行反复的、可控的实验，在动物身上进行病因病理、药物治疗等的研究，才能有助于尽快地攻克此病。文献一子宫内膜异位症动物模型的构建1、材料与方法1. 1　标本来源　2002 年 4月至 2002年 7 月因 EM 入我院妇产科行腹腔镜诊治的患者 8 例。术后病理均证实为 EM, 取其在位内膜及腹腔内膜异位囊肿壁。1. 2　实验动物[ 1]　SCID 小鼠, 雌性, 8 周龄, 体重 20～ 25g,46只, 由军事医学科学院实验动物中心提供 SPF(specific -pathogen free) 条件饲养。1. 3　方法1. 3. 1 　标本处理　标本置入盛有 4ml DMEM 培养液(含100U/ml 青霉素, 100U/ml链霉素) 无菌瓶后, 置于冰壶, 快速送入实验室接种( 1h 内, 否则影响接种成功率)[ 1]。标本用0. 1mol/L 的无菌 PBS漂洗 3 次, 尽量洗去血块和粘液。然后于无菌培养皿内等量分置, 分装入盛有 D MEM 液的无菌管内, 准备接种。1. 3. 2　动物处理　用 1%的戊巴比妥钠约 0. 07ml 腹腔注射麻醉 SCID 小鼠, 待小鼠麻醉后固定于操作板上, 腹部酒精消毒备皮, 夹起腹部皮肤, 用无菌小弯剪剪开 0. 5cm 长的小口,将已备标本种植于皮下, 无菌丝线缝合及纱布包裹。种植后第 2天, 于小鼠腿部肌肉注射 0. 02 ml( 1mg/ml)苯甲酸雌二醇, 以促进种植内膜的生长[ 2]。1. 3. 3　动物分组　将在位内膜种植于 SCID 小鼠腹部皮下,为在位内膜组, 再分为 2 周组、4 周组、6 周组、8 周组, 每组10只。取 SCID 小鼠 6 只将巧克力囊壁种植于其腹部皮下,为异位内膜组。2　结果2. 1 　种植成功率　除去非手术原因死去的小鼠外 ,44 只成活小鼠病灶均种植成功 ,成功率为 100%。2. 2 　在位内膜组　分别于 2周、 4 周、 6 周、 8 周从小鼠的腹部皮下取出病灶, 常规石蜡包埋 ,HE染色, 可见明显的腺体和间质。由经验丰富的病理科医生鉴定为子宫内膜腺体和间质。光镜下 ,各组间形态学无明显差异。2. 3 　异位内膜组　种植巧克力囊壁的病灶 ,HE 染色切片未见腺体和间质, 却见丰富的纤维结缔组织 ,经病理科医生鉴定可能为卵巢的纤维组织。文献二自体移植法复制大鼠子宫内膜异位症模型*实验动物1.普通级雌性成熟未交配过的 SD 大鼠 30 只, 体重180- 220 g.2. 造模方法[1]2.1 筛选合格大鼠所有雌性大鼠每日进行阴道细胞涂片检查, 选择动情周期 4- 5 d 的大鼠, 随机分为模型组及假手术组。在第三个动情周期的动情期, 将大鼠进行自体移植法手术造模及假手术。2.2 手术在无菌条件下, 以 1% 的戊巴比妥钠( 40mg/ kg, ip) 麻醉, 然后固定大鼠四肢, 剖腹, 切口长约1-5 cm, 切取右侧宫角处的一段子宫, 长约 1 cm, 迅速将其置于生理盐水中, 将子宫内膜与肌层分离, 并剪取两块各约 5 mm的内膜组织块, 将上皮层反向对着体壁, 将组织块四角缝固在腹壁上, 左右各一。右侧宫角断端吻合结扎。关腹前予以庆大霉素生理盐水溶液冲洗腹腔, 最后缝合各层组织, 普通级环境饲养。4周后再次剖腹观察移植物生长状况, 发现移植物体积增大, 出现液体积聚, 移植物被结缔组织或大网膜覆盖并有血管形成。同时切取移植物送检, 证实移植物中有子宫内膜上皮细胞、腺体及间质的生长, 并有分泌活动。说明造模成功。2.3 假手术组处理方法手术条件及麻醉、开腹方法均同 EMT 模型组, 开腹后将右侧子宫角结扎, 目的使假手术组达到与 EMT 组均为单侧宫角子宫的生殖环境。同样以庆大霉素生理盐水冲洗腹腔, 逐层缝合各层组织。所有实验动物均同样环境饲养。3 观测指标以阴道细胞涂片法分别观察两组大鼠造模后 4周、 8 周性周期的情况, 观察内容包括是否存在动情间期、动情前期、动情期、动情后期的周期性变化即是否有排卵迹象、周期时间长短