化浊润燥降气方对食管癌前病变模型小鼠P16蛋白表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 化浊润燥降气方对食管癌前病变模型小鼠P16蛋白表达的影响 1河北省中医院肿瘤二科 河北 石家庄050011 2河北医科大学第四医院科研中心 河北 石家庄050041 3河北医科大学研究生学院 河北 石家庄050017 4.河北省南宫市中医院内科 55750 河北省高层次人才资助项目，编号：B2012003007 摘 要：目的 观察小鼠食管癌前病变组织P16的表达及中药复方化浊润燥降气方的干预作用。方法：将130只小鼠分为正常组、模型组、阳性对照组、中药预防组（简称“预防组”）、中药治疗组（简称“治疗组”），采用4-硝基喹啉-氧化物(4-NQO)制备小鼠食管癌前病变模型，采用流式细胞检测、免疫组织化学方法观察各组食管组织中P16的表达。结果：14周末食管癌前病变模型成功，24周末实验结束。24周末模型组小鼠P16表达水平与正常组相比明显升高（P＜0.05）；流式细胞检测示阳性对照组、预防组、治疗组分别与模型组相比，明显降低（P＜0.05）；预防组与阳性对照组无明显差异（p＞0.05）；预防组P16表达高于治疗组（P＜0.05）。免疫组织化学检测示阳性对照组与模型组相比无明显差异（P＞0.05）；预防组、治疗组分别与模型组及阳性对照组相比，明显降低（P＜0.05）；预防组P16表达低于治疗组（P＜0.05）。结论：小鼠食管癌前病变组织存在P16蛋白高表达，化浊润燥降气方能减轻食管癌前病变小鼠P16蛋白的表达。中药预防用药在免疫组化法检测中有一定优势，但在流式细胞检测中，预防用药未显示明显优势，P16作用机理有待于进一步研究。 关键词：食管癌前病变；化浊润燥降气方；4-硝基喹啉-氧化物；P16。 【中图分类号】R814.2【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0002-02 本实验通过建立小鼠食管鳞状上皮癌前病变动物模型，观察化浊润燥降气方对食管癌前病变模型小鼠P16蛋白表达的影响，探讨化浊润燥降气方的部分作用机理。 1实验材料 1.1 实验动物 选取清洁级健康SPF级C57BL/6小鼠130只，雌雄各半，4周龄，体重17-20g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2012-0001。 1.2 药物制备 1.2.1 造模药物4-NQO (购自Sigma??司)：将1g 4-NQO溶于50ml蒸馏水，配成浓度为2%的稀释液，4℃冰箱避光保存。使用时取0.5ml 2%原液加入100ml饮用水中，配成100mu;g/ml浓度。每100g小鼠每日用4-NQO 2500mu;g，即口服25ml含有4-NQO的饮用水。 1.2.2 阳性对照组药物ATRA（购自Sigma 公司）：使用时将30mg ATRA 溶于20ml稀释后的甲基纤维素中，每20g小鼠每次灌胃剂量为0.15mg，每周3次。 1.2.3 化浊润燥降气方 中药免煎颗粒化浊润燥降气方（药物组成：丹参、沙参、郁金、砂仁、荷叶、茯苓、浙贝母、藿香、佩兰、冬凌草、全蝎）。由河北省中医院药学部提供，每付中药生药含量131g，免煎颗粒为13.7g，小鼠用量与人用量的比例为0.0026:1，每20g小鼠服用0.2ml含有中药的水溶液。 1.3 主要试剂及仪器 羊抗p16多克隆抗体（Santa Cruz公司）；免疫组织化学试剂盒（北京中杉金桥生物有限公司）；DAB显色剂（北京中杉金桥生物有限公司）；Epics-XLⅡ型流式细胞仪（美国Beckman Coulter公司）。 2实验方法 2.1动物分组及模型制备 采用随机分组的方法将130只小鼠分为正常组、模型组、阳性对照组、中药预防组（简称“预防组”）、中药治疗组（简称“治疗组”），正常组、阳性对照组每组20只，其余每组30只。各组小鼠雌雄无明显差异，雌雄分笼。正常组常规饲养，不做特殊处理。其余110只小鼠，每日饮用100mu;g/ml的4-NQO水溶液，正常喂养饲料。预防组在开始造模同时给予化浊润燥降气方灌胃，每周3次，剂量为20g小鼠服用0.2ml浓缩中药免煎颗粒。各组小鼠在给药期间每周测体重一次，根据体重调整给药剂量。14周末癌前病变模型成功。小鼠停用4-NQO水溶液。之后模型组常规饲养；阳性对照组小鼠开始给予ATRA，剂量为每20g每次灌胃剂量为0.15mg，每周3次；预防组小鼠继续给予化浊润燥降气方灌胃，剂量如前；治疗组小鼠在模型制备成功时开始给予化浊润燥降气方灌胃，用量同预防组。24周末模型组5只小鼠食管上皮均有癌变，全部处死