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速率法测定ALT
ALT测定 速率法 学习目的 掌握速率法的原理 熟悉速率法测定ALT注意事项和比色法与速率法的区别 了解ALT的临床意义 酶活性浓度测定方法 平衡法:通过测定酶促反应开始至反应达到平衡时产物或底物浓度的总变化量来求出酶活性浓度的方法,文献上也称终点法。 定时法: 多将酶固定作用一段时间,然后加入强酸,强碱,蛋白沉淀剂等终止酶促反应,测定这段时间内底物的减少量或产物的生成量,也称为”两点法”。 连续监测法：连续测定酶反应过程中某一反应产物的浓度随时间变化的多点数据,求出酶反应初速度,间接计算酶活性浓度的方法。 基本原理 实验用试剂 R1： α-酮戊二酸 15mmol/L NADH 0.18mmol/L LDH 5000U/L R2： Tris缓冲液 100mmol/L （PH7.3) L-丙氨酸 500mmol/L 操作步骤（工作液配制） 操作步骤（手工） 操作步骤（半自动） 具体操作先看示教 注意事项 反应准确计时 检测标本最好用新鲜标本 溶血的影响 评价 准确性好 重复性好 操作简便 实验条件要求高，成本高 临床意义 ALT主要存在肝脏 ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细胞的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释放入血，致血中该酶活性浓度增加，故测定ALT常作为判断指标。 思考题 比较赖氏法和速率测定ALT。 * * L-丙氨酸 + α-酮戊二酸 α -丙酮酸 L-谷氨酸 NADH + ALT + 乳酸 + NAD+ LDH 取R2 10ml溶解R1 按S：R=1：100制备各测定管 结果计算： 酶活力=- △A/min*1746（U/L） 样本和试剂迅速混匀后，340nm波长，试剂空白调零， 室温测定1、2、3分钟的吸光度，得到-△A/min *
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