农杆菌介导的遗传转化在水稻基因工程中的应用-中国稻米.pdfVIP

维普资讯 中国 米 20O7年第3期 农杆菌介导的遗传转化在水稻基因工程中的应用 潘素君 戴良英 刘雄伦 王国梁 (湖南农业大学生物安全科技学院，湖南 长沙 410128；。湖南农业大学水稻基因组学实验室，湖南 长沙 410128； 。美国俄亥俄州立大学植物生理实验室，美国俄亥俄州 43210) 摘 要：农杆菌作为一种天然的遗传转化系统，在水稻基因工程中倍受重视。本文概述了农杆菌介导转化水稻 的原理、影响因素、遗传改良上的应用及存在的问题。 关键词：农杆菌转化系统 ；原理；影响因素；遗传改良 水稻是全世界最重要的粮食作物之一 ，其栽培面 virD1和VirD2共同作用 ，由T—DNA右边界开始 积和总产量仅次于小麦。水稻不仅作为食品支持 26亿 向左边界切割产生一条T—DNA链 (T一链)，T一链 5 人的生命 ，还是禾谷类作物中开展分子生物学研究的 末端与VirD2结合，其余部分与VirE2结合，组成T一 “模式植物”。随着分子生物学和分子遗传理论的迅速 复合体。T一复合体被转移到农杆菌外，通过植物细胞 发展，利用遗传工程手段，有 目的地将外源基因或DNA 壁上由VirB蛋白组成的通道进入到植物细胞内。VirD2 构建导入水稻基因组 ，通过外源基因的直接表达 ，或通 和VirE2上的核定位信号 (NLS)被转运蛋白识别 ，经过 过内源基因表达的调控 ，获得抗病、抗虫、抗逆、高产优 主动运输过程通过核孔进入细胞核内，转入细胞核的 质的优 良品种已成为水稻育种的重要手段。农杆菌介 T—DNA以单拷贝或多拷贝的形式整合到植物染色体 导法因其简单易行、转化率高、可导入较为完整的基 l二。 因、整合位点稳定、拷贝数低 、外源基因表达比较稳定 2 农杆菌介导转化水稻的影响因素 而在水稻的遗传转化中得到广泛应用。 2．1 菌株和载体 1 农杆菌介导的遗传转化原理 选取合适的农杆菌菌株和高效的载体系统对转化 农杆菌转化系统是一种天然的基因转化系统，转 至关重要。目前，用于水稻转化的农杆菌菌株较为普遍 化植物细胞的农杆菌有两类，即根癌农杆菌和发根农 的有A281、A656、LBA4404、EHA101、EHA105、AGL1。 杆菌。根癌农杆菌所含质粒是Ti质粒，发根农杆菌所 Hieit¨等用菌株LBA4404、EHA101与载体 pIG121Hm、 含质粒是Ri质粒。在水稻转化中，常用的是 Ti质粒。 pTOK233做试验 ，发现在 Tsukinohikari培养基 中 Ti质粒上含有可转移 DNA(T—DNA)区、结合区(Con)、 LBA4404(pTOK233)比LBA4404(pIG121Hm)和 EHA101 复制起始区(Ori)和毒性区(Vir)。其中与冠瘿瘤生成有 (pIG121Hm)介导转化效果要好，在 Koshihikari培养基 关的是Vir区和T—DNA区。T—DNA区左右边界各有 中LBA4404(plG121Hm)最有效 ，EHAIOI(pTOK233)对 25bp的重复序列，左边界缺失仍可致瘤，而右边界缺 水稻的转化频率最低。LBA4404(pTOK233)对爪哇稻转 失则不能致瘤。两个边界之间是生长素和细胞分裂素 化频率较高。比较LBA4404、EHA105、AGL1这三种农杆 合成基因以及冠瘿碱合成基因。Vir区为 30bp，VirA、 菌菌株对水稻愈伤组织的转化能力，EH