毛细管电泳与超临界流体色谱.ppt

四、两相分配与权均淌度 如果特意在毛细管中引入另一相，称为 P 相，样品在电迁移过程中同时会发生相间分配，其迁移速度或淌度将发生变化，这样改变了的粒子迁移速度和淌度，称为加权平均速度和加权平均淌度，简称权均速度和权均淌度。 设相分配过程远快于电泳过程，则有： 容量 因子 样品在P相 中的分子数 样品在溶剂相 中的分子数 P相的表观淌度 P相在电场中可静止，也可迁移，运动方向可正、可负。利用引入P相，可使中性组分产生不同的权均淌度，因而解决了中性组分在毛细管电泳中的分离问题。 （一）迁移时间tR 五、分离效率与谱带展宽 带电粒子从进样口迁移至检测窗所用的时间，称为迁移时间。 迁移时间 毛细管的 有效长度 毛细管的 总长度 外加电压 （二）柱效和塔板高度 理论塔板数 迁移时间 半峰宽 塔板高度 毛细管的 有效长度 （三）谱带展宽 1. 流型 以电场力驱动产生的EOF，与HPLC 中靠外部泵压产生的液流不同。EOF的流型属扁平流型或称“塞流”。扁平型的塞子流不会引起样品区带的增宽，是毛细管电泳高效的重要原因 。 HPLC的流型则是抛物线状的层流，它在壁上的速度为零，中心速度为平均速度的2倍。 Van Deemter方程： 空心毛细管柱，则用Golay方程式表示： 涡流扩散项 分子扩散项 传质阻力 由于在毛细管电泳中，无固定相和流动相两相，因此不存在传质项，而且速度流型又是扁平的，于是只有纵向扩散项： 扩散系数 毛细管电泳特别适合分离生物大分子。 2. 自热 管径是影响自热的一个重要因素。 理论上：E=50kV/m，c=0.01mol/L，d＜140?m 实际应用25～75 ?m的毛细管 使用小内径、大外径的毛细管，适当降低外加电压、降低缓冲溶液的浓度以及对毛细管恒温等均可以减小温度梯度，提高柱效。 3. 扩散与吸附 （1）扩散 （2）吸附 组分与毛细管壁的相互作用主要为管壁对组分的吸附。。 六、分离度 分离度是指将淌度相近的组分分开的能力。 迁移时间 峰底宽度 标准偏差 分离度也可表示为柱效的函数： 不考虑电渗流时： 当考虑电渗流时： 第三节 毛细管电泳仪器系统 毛细管电泳仪主要包括高压电源、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。 1 2 3 4 6 5 5 图 毛细管电泳装置示意图 1．高压电源 2．检测器 3．液冷温控毛细管 4．数据记录系统 5．缓冲液槽 6．缓冲液 一、高压电源 常用的高压电源为能提供0～30 kV，电流为200～300 ?A的连续可调的直流高压电源，为了获得迁移时间的高重现性，操作电压要稳定在±0.1%范围内。 高压电源要能够切换极性，最好是双极性高压源。 必须注意高压的安全保护问题。 高压源有恒压、恒流或恒功率等方式。最常用的是恒压源。 二、进样系统 毛细管内径很小，进样量必须很少，一般进样长度为毛细管总长度的1%～2%。进样体积为纳升（nl）级。所以毛细管的进样采用无死体积的进样方法。 毛细管的进样是让毛细管直接与样品接触，然后由重力、电场力或其他动力来驱动样品流入管中，进样量可以通过控制驱动力的大小或时间长短来控制。 在毛细管电泳中常采用的进样方式为电迁移进样和流体动力学进样，除此还有扩散进样。 1. 电迁移进样 进样体积 毛细管的 横截面积 进样 时间 进样量 样品浓度 电动进样的控制参数是电场强度E和进样时间?。通过改变进样电压和进样时间可以控制进样量。其中E是进样动力，取值多在1～10 kV/60cm之间，仅为分离时操作电压的1/5～1/3。? 是进样时间，取值通常在1～10 s之间，有时可达1 min或更大。 电动进样对毛细管内的填充介质没有特别限制，可实现完全自动化，但在电迁移进样中存在一种歧视效应，即电泳淌度大的组分进样量大，电泳淌度小的组分进样量小或不进，会降低分析的准确度和可靠性。 2. 流体动力学进样 进样量 样品浓度 毛细管两端压力差 毛细管长度 溶液的黏度 * 第四部分 毛细管电泳与超临界流体色谱 第一章 毛细管电泳 第一节 概述 一、毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis，HPCE），是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和（或）分配系数的不同而进行分离的一类新型液相分离技术。 二、毛细管电泳的发展史及新动向