EID3基因在大肠癌传代细胞mRNA的表达及其克隆.pdf

· 38 · 中国癌症防治杂志2012年3月第4卷第1期 ChinJofOncolPreyandTreat，Mar2012，Vo1．4，No．1 EID3基因在大肠癌传代细胞 mRNA的表达及其克隆 王钦富 李 志 牟红梅 徐 娜 张雪梅 韩 慧 作者单位：116622 大连 大连大学免疫学研究所；大连中心医院检验科 摘【要】目的研究新的大肠癌相关性抗原EID3基因的克隆及其诊断价值。方法 用SEREX技术筛选睾丸组织cDNA 噬菌体表达文库 ，发现了一类似于肿瘤抑制基因 (E1A基因)的EID3基因 (NM_001008394．1)，构建原核表达载体 pET32k—EID3，IPTG诱导重组EID3蛋白质的表达，并利用NiNTAHisBind树脂纯化该重组蛋白质。用 RT—PCR技术研 究EID3mRNA在正常组织和大肠癌传代细胞的表达。结果 经PCR扩增成功获得 1002bp的人EID3基因，测序正确。 在大肠杆菌中目的蛋白质的表达量 占菌体总蛋白质的10％，SDS．PAGE及 Westernblot分析显示，其相对分子质量为 39000KD，纯化后的6xHisEID3纯度可达92％。通过RT—PCR分析发现 ，EID3基因在43例大肠癌传代细胞株中有39 例阳性，阳性率为90．7％。在正常组织中，除睾丸组织不表达或有极低水平转录外，余均不表达。结论 EID3基因克隆、表 达及纯化的成功，为其今后的肿瘤诊断和肿瘤多肽疫苗治疗研究奠定了基础。EID3mRNA表达检测用于诊断大肠癌 ，可 能具有高特异性和高敏感性的特点。EID3蛋白在大肠癌患者中能够诱导机体的抗体免疫应答，可能成为一个新的大肠 癌相关性抗原分子，其用于诊断大肠癌的可行性，有待进一步深入研究。 【关键词】大肠癌；EID3；克隆；mRNA 【中图分类号】R734．3+8 【文献标识码 】A 【文章编号】1674—5671(2012)01—05 doi：10．3969／j．issn．1674—5671．2012．01．O9 EID3genecloningandmRNA expressionanalysisincoloncancercelllines WANG Qin—fu，LIZhi，MUHong—mei，XUNa，ZHANGXue-mei，HANHui(InstituteofImmunology，DalianUniversity，Dalian 116622，P．R．China；DalianCentralHospital，Dalian116021，P．R．China)Correspondingauthor：WANGQin—fu；E—mail：qinfuwang@126． 【Abstract】ObjectiveToclonethegeneencodingthenovelcoloncancer-associatedantigenE／D3andinvestigatethepossibilityof usingEID3mRNA expression to diagnosepatientswith colon cancer．M ethodsScreeningofatestiscDNA libraryusing sera from patientswithcoloncancerledtodiscovery oftheEID3gene(NM_1)，similartotumorsuppressorgeneE1A．Thepattern ofEID3mRNA expressionwasinvestigatedinnorrn~tissueandcoloncancercelllinesusingreversetranscription—PCR (RT—PCR)． ResultsTheEID3gene(1002bp)wasclonedbyPCRandoverexpressedinE．coliatlevelsreaching10％oftotalprotein．Themole— cnlarweightwasconfirmedtobe39kDabySDS—PAGEandW esternblot，anditwaspurifiedto92％homogeneity．Thegeneencoding EID3islocatedonchromosome19q13．2．whichcontainsoneexon．RT—PC