纳米磁性壳聚糖微球固定化酵母醇脱氢酶的研究.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（７）：７１～７７ 纳米磁性壳聚糖微球固定化酵母醇脱氢酶的研究  王　艳 　聂志勇　姚莉丽　刁巍巍 （中南大学化学化工学院　长沙　４１００８３） 摘要　建立了以纳米级磁性壳聚糖微球（ｍａｇｎｅｔｉｃｃｈｉｔｏｓａｎｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ，ＭＣＳ）为载体固定化酵 母醇脱氢酶（ｙｅａｓｔａｌｃｏｈｏｌｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＹＡＤＨ）的方法，优化了ＹＡＤＨ的固定化条件，考察了固 定化酶的性质。结果表明，ＭＣＳ呈规则的圆球形，粒径在３０ｎｍ左右，具有较好的磁响应性。酵 母醇脱氢酶固定化适宜条件为：５０ｍｇ磁性壳聚糖微球，加入２０ｍｌ０．２５ｍｇ／ｍｌ酵母醇脱氢酶（蛋 白质含量）磷酸盐缓冲液（０．０５ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．０），在４℃固定２ｈ。ＭＣＳ容易吸附酵母醇脱氢酶， 但吸附的酶量受载体与酶的比例、溶液的离子浓度、溶液ｐＨ的影响明显，而温度对吸附的酶量的 影响则相对较弱。相对于游离的酵母醇脱氢酶，固定化酶的最适温度略有升高，可明显改善其热 稳定性、酸碱稳定性、操作稳定性和贮存稳定性。 关键词　磁性壳聚糖微球（ＭＣＳ）　酵母醇脱氢酶（ＹＡＤＨ）　固定化 中图分类号　Ｑ５９９ 　　用于固定化酶的载体的种类很多，磁性物质作为 脱氢酶的催化效率，可以实现生产工艺和检验操作的 ［１］ 连续化和工业化。用磁性纳米微球做载体的研究报道 一种绿色材料 是近年来研究较多的材料。１９７３年， ［２］ 只见于Ｓｈｉｎｋａｉｅｔａｌ，并且报道中剩余活性也相当低 Ｒｏｂｉｎｓｏｎ等 第一次将磁性物质作为酶固定化的载 ［９］ 体，此后，磁性载体越来越多地应用于细胞和酶的固定 （１２％） ，但是采用纳米磁性壳聚糖微球为载体固定 化［３～５］。壳聚糖（ｃｈｉｔｏｓａｎ，１，４２氨基葡萄糖）是甲 化醇脱氢酶还未见报道。本文以磁性壳聚糖微球为载 β 壳素的脱乙酰化产物，具有生物降解性、生物相容性、 体进行酵母醇脱氢酶固定，探讨了酵母醇脱氢酶的固 生物亲和性和无毒等特性，其分子链上大量存在的羟 定化条件以及固定化酶的性质。 基和氨基又使其易于进行化学改性，所以具有很高的 １　材料与方法 应用价值，被广泛应用于废水处理、酶固定、药物传递、 纺织等领域［６～８］。醇脱氢酶能催化氧化醇类和还原醛 １．１　材　料 酮类羰基化合物。它在化学工业中许多材料和反应中 　　啤酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中南大学化学 间体的制备方面具有广阔的应用前景，并因此而受到 化工学院制药工程系菌种保藏室保藏；酵母醇脱氢酶 关注。比如生物传感器的合成，辅酶ＮＡＤ（Ｐ）和ＮＡＤ （自制）；壳聚糖（上海伯奥生物科技有限公司，脱乙酰 （Ｐ）Ｈ以及生物因子的再生等，但醇脱氢酶的稳定性很 度在９５％以上）；２５％戊二醛（Ｂ．Ｒ，国药集团化学 差而因此限制了它的实际应用。近年来，为了提高醇 试剂公司）；其余试剂均为分析纯，实验用水为双蒸水。 脱氢酶的稳定性，人们将其固定在不同的载体上，常用 １．２　方　法 ［１０］ 的载体有纤维素、淀粉、海藻酸钙等，但它们都具有易 １．２．１　ＭＣＳ的制备 　０．４ｇ壳聚糖用３０ｍｌ５％ 流失、回收率低等缺点。用磁性纳米壳聚糖微球作载 醋酸溶解后加入０．４ｇＦｅＯ纳米粒子，超声分散 ２５