鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒说明书.doc

大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫盒使用说明书 本试剂仅供研究使用实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定中水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。-20℃保存，但应避免反复冻融μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为240ng/L，160ng/L ，80ng/L，40ng/L， 20ng/L）。 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻混匀分钟甩干μl，空白孔除外。μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应。450nm波长依序测量各孔的度（OD值）浓洗涤液会有析出，稀释时可在水浴中加温助溶乘以计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以，即为样品的实际浓度。检测范围：6.25 pg/ml-400 pg/ml 灵敏度：1.56 pg/ml 保存条件及有效期： 1.试剂盒保存：；2-8。 1