志贺毒素2型噬菌体ΦMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性.pdfVIP

Paper 纛。；。。——。崩—。。。一…——……。。。。一。。。。。。。…Research 微生物学报Acta Sinica Microbiologica 48(9)：1227-1233；42008 September ISSN 0001—6209；CNll-1995／Q http：／／joumals．im．ac．cIl 及其感染特性 苏良科1，严亚贤1，陆承平1．2+ (1上海交通大学农业与生物学院，上海市兽医生物技术重点实验室。上海200240) (2南京农业大学动物医学院，农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京210095) 摘要：【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体，来观察它对不同血清型大肠杆 菌的感染特性。【方法】利用九噬菌体的Red重组系统，将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌 0157：H7 Min27株的stx2基因中，获得0157：H7 对该突变菌株进行诱导，结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的志贺毒素2型噬菌体，命名为 60和O 21株不同血清型大肠杆菌后的裂解和溶原转换情况。【结果】2株血清型分别为0 138的大 肠杆菌可以被中Min27(Astx：：cat)溶原感染，表现出对氯霉素的抗性，但没有形成噬菌斑，而大肠杆 菌MGl655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后，能释放出感染性的 以感染和溶原特定的大肠杆菌，且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体，显示出①Min27噬菌体具 有携带外源基因在若干不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力，为进一步研究Stx噬菌体的感染 机理和志贺毒素表达调控奠定了基础。 关键词：大肠杆菌0157：H7；Stx2噬菌体；OMin27(Astx：：cat)；感染特性 中图分类号：R37 文献标识码：A 文章编号：0001．6209(2008)09．1227．07 toxin 产志贺毒素大肠杆菌(Shigaproducing素(Shiga Eescherichia coli，STEC)是一类重要的食源性致病的形式：Stxl和Stx2，它们的核酸序列和免疫原性有 菌，包括100多种不同血清型的大肠杆菌…。0157：H7所差别【8】。Stxl和Stx2分别由整合在大肠杆菌染色体 是STEC中的一个主要的血清型，由它引发的食物感 染事件在全球范围内一直有零星暴发或散发，影响较 大的事件有1996年Et本发生的9000多人集体感染事在0157：H7的进化中起着重要的作用，是引起宿主菌 件，2000年中国的安徽、江苏等地发生的0157中毒基因组多样性的主要因素【9_11。 感染事件和2006年9月美国多个州发生的因生食被 要了解噬菌体介导的基因转移在致病菌进化中 0157污染的“毒菠菜”中毒事件【2_5】。0157：H7感染人的作用，就必需了解和研究介导基因转移的噬菌体自 后引起的主要临床(出血性结肠炎、溶血性尿毒综合 身。携带有标记基因(如GFP，抗性基因)的重组噬 征和血栓性血小板减少性紫癜)与它所产生的志贺毒 菌体是一个非常有用的工具。自杀性质粒是常用的突 基金项目：国家自然科学基金 ’通讯作者。Tel／Fax：+86．25E-mail：lucp@njau．edu．cn 收稿日期：2008．03．26：修回日期：2008．05．26 Suela1．／Acta Liangke Microbiologica DNA片段的 变载体，如PJP5603、pCVD442、pKNGlol和pFHl0素抗性基因(cat)；连接了一条Adaptor 等，在文献中都有描述【12．151，它们都是