耐冷菌Pseudomonas spW7产低温蛋白酶的分离纯化及酶学性质研讨.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 低温蛋白酶在低温条件下具有较高的催化活性，在食品、洗涤、化妆品、医 药和环境生物治理中具有潜在的应用价值。本论文对实验室保存的耐冷菌 Pseudomonas sp．W7所产的低温蛋白酶进行分离纯化，并系统的研究了该低温蛋白 酶的酶学性质，为后期低温蛋白酶的基因克隆和工业化应用奠定基础。 本研究是以实验室保存的一株耐冷菌Pseudomonas sp．W7为出发菌株，采用低 温摇床20℃培养48h，发酵液经过12000r／mm离心后，经硫酸铵分步沉淀、透析、 G100凝胶过滤层析进行分离纯化，所得到的蛋白经过电泳分析，其分子 Sephadex 纯化倍数为48．86倍，回收率达到11．40％。 在获得纯化酶基础上，对低温蛋白酶的酶学性质进行了研究。该酶最适反应 温度为37。C，在20．35。C范围内热稳定性较好，保持了80％以上的酶活性，当温度 升高到55。C，热处理60min后，酶活力完全丧失；最适pH值为7．2，属于中性蛋白 酶，在pH4．10范围内都具有较强的催化活