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重庆医学2013年5月第42卷第13期
·论 著·
Notchl
miRNA干扰质粒构建及功能鉴定”
周学亮，万 力，刘季春一
(南昌大学第一附属医院心脏外科，江西南昌330006)
针
摘要：目的 设计及构建大鼠Notchl微小干扰核糖核酸(miRNA)干扰质粒，最终筛选出效果最好的干扰质粒。方法
miRNA表达栽体枸建干
对大鼠Notchl基因分别设计3对pre—miRNA序列，通过L连接酶克隆至pcDNA“6．2-GW／EmGFP
blot
2000转染至H9c2心肌样细胞，荧光显微镜下观察绿色荧光确定转染效率。Western
扰质粒，基因测序鉴定，经Lipofectamine
检测3对干扰质粒、阴性对照质粒对Notehl胞内结构域(N1ICD)表达的影响。结果测序表明，Notchl干扰序列及读码框完全
正确，荧光显微镜观察H9c2心肌样细胞miRNA瞬时转染效率在80％左右。Western
最强。结论 成功构建大鼠NotchlmiRNA的有效干扰质粒，为Notchl信号通路在心血管领域的功能研究奠定了基础。
关键词：Notch信号通路；微小干扰核糖核酸；干扰质粒
03
文献标识码：A 文章编号：167l一8348(2013)13—1447
doi：【0．3969／j．issn．1671—8348．2013．13．003
ConstructionandfunctionidentificationofNotchlmiRNArecombinant vectors’
eukaryotic
expression
Zhou Li，Liuj ichu{f
Xueliang，Wan
Cat‘diac 330006，China)
(Depat‘tmentof Su,‘gy，FirstAJ／iliatedHospital，Namhang
University，Nanchang，Jiangaci
constructand the for toscreen
7Fo vectorsNotchl，and
Abstract：0bjective identifymicroRNA(miRNA)eukaryoticexpression
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