全细胞催化.pptVIP

微生物全细胞催化技术在工业 生产中的应用 1.定义：全细胞催化是指利用完整的生物有机体(即全细胞、组织甚至个体)作为催化剂进行化学转化，其本质是利用细胞内的酶进行催化。 该法是介于发酵法和提取酶催化法之间的一种生物催化技术。 2.优点：细胞内完整的多酶体系可以实现酶的级联反应，从而弥补酶法催化中级联催化过程不易实现的不足，提高了催化效率，同时，又省去了繁琐的酶纯化过程，制备更加简单，生产成本更低。 生命科学的飞速发展也大大增加了全细胞催化的可行性，如利用DNA 重组技术，可使目标酶在不同宿主细胞中大量表达。利用这种分子生物学技术甚至可以修饰宿主细胞的代谢途径，合成复杂的代谢产物。 目前，部分已成功运用全细胞催化技术的实例见下表。 目前微生物全细胞催化在工业合成过程中的应用 产品 底物 微生物 酶 谷胱甘肽 谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸 重组大肠杆菌 Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 谷胱甘肽合成酶 L-甘油醛 甘油 重组大肠杆菌 甘油脱氢酶 葡萄糖脱氢酶 手性醇 相应的酮类 重组大肠杆菌 氧化还原酶 抗坏血酸-2-磷酸 抗坏血酸 鞘氨醇单胞菌 磷酸激酶 泛酸盐 泛酰内酯 尖孢镰刀菌 内酯酶 羟脯氨酸 脯氨酸 重组大肠杆菌 脯氨酸羟化酶 1.生物柴油的开发 2.手性醇的生产 3.生物转化法合成核苷酸 日本的Yuji Shimada等利用Novozym 435(Candida antarctica)脂肪酶在分段反应器中通过流加甲醇生产生物柴油，产品中脂肪酸甲酯的体积分数可以达到93%以上，并且经过100天的反应，酶不会失活。 2008年Hama等首次采用重组真菌作全细胞催化剂生产生物柴油。将异孢镰刀菌的脂肪酶基因转化到米根霉进行异源表达，用多孔生物量支架颗粒固定重组米根霉细胞，用于催化甲醇解反应。 结果表明，当向反应体系中添加5%水时，不但可以有效阻止甲醇对脂肪酶的失活效应，而且还使部分甘油酯的酰基转移更容易，使用10次后甲酯的产率仍可达94% 。表明重组米根霉全细胞催化剂与野生米根霉全细胞催化剂相比，具有更高的甲酯得率且脂肪酶更加稳定。 Gao等从土壤中分离出一种产脂肪酶的细菌Proteu ssp.K107克隆其脂肪酶基因在大肠杆菌BL21中进行表达，将重组大肠杆菌以全细胞催化剂的形式来催化生产生物柴油。 结果表明，15℃时，当用0.3% (质量分数)十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)处理细胞后，其催化活力显著提高，反应12 h 后生物柴油的产率接近100%。 与其他全细胞催化剂相比，大肠杆菌全细胞催化剂对甲醇有较高的耐受性，这为解决生物柴油生产过程中甲醇致使脂肪酶失活提供了新的思路。 目前我国酶法生产生物柴油的工作也有重要进展，其中北京化工大学采用自己开发的酵母脂肪酶进行酶法合成生物柴油研究，其生物柴油转化率已达到96%，固定化半衰期达200h以上。 用生物酶法制备生物柴油目前存在着一些问题： 反应物甲醇容易导致酶失活 副产物甘油影响酶反应活性及稳定性 酶的使用寿命过短等 2.手性醇的生产 手性醇在一些特殊化学和制药工业中是一个极为重要的原料，尤其在制药工业。 手性醇作为合成手性药物的重要中间体，在当今制药领域具有广泛的用途。 生产手性醇常用方法有贵金属催化合成法和生物对称催化合成法。 生物催化合成法是利用生物代谢过程中产生的酶，选择性的催化底物反应，从而获得高纯度的手性单体。 该反应具有反应条件温和、催化效率高、立体区域选择性好，而且可以完成一些普通化学无法进行的反应等特点，受到有机化学家、生物学家及药物学家的极大重视。 生物催化法一般通过2 种方式: 一是由拆分外消旋底物生成，二是由手性前体化合物直接合成。 后者的优点是可预期催化转化率。 Kataoka等构建了一个新的生物还原系统：通过一对组合酶羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶，能把前手性羰基底物转化为手性醇。迄今已从微生物中获得十几个具有底物特异性和立体专一性特征的酶，并建立了一个很大的羰基还原酶库。 该酶库中一个成功的例子就是用能同时表达假丝酵母的4-氯-3-羟基丁酸乙酯还原酶基因和巨大芽孢杆菌的葡萄糖脱氢酶基因的重组大肠杆菌催化4-氯代乙酰乙酸乙酯生成S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯。 在适当的条件下300 g/L的4-氯代乙酰乙酸乙酯转化为S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯，其摩尔产率96%，而NADP+ 的酶变率为21600 mol/mol。 S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯是抑制羟甲基戊二酰辅酶A 还原酶的重要起始原料，在Kaneka公司已经商业化生产。这种共表达系统也适合于其他NAD(P)H依赖型反应。