分子诊断第5章.pptVIP

2.RNA的保存 三、核酸的鉴定与保存 RNA溶于H2O或0.3mol/L的NaAc溶液中，-70℃ 保存 RNA溶液中加入RNasin或VRC，可延长保存时间 用于配置试剂及溶解RNA的H2O均应经DEPC处理 第二节 真核基因组DNA的分离纯化 生物体组织细胞 玻棒缠绕法 酚抽提法 基因组 DNA粗品 PFGE分离 特定的DNA片段 AGE分离 PAGE分离 乙醇沉淀洗涤 基因组DNA纯品 精分离 粗分离 前处理 离子交换层析纯化 有机溶剂抽提 细胞裂解蛋白质变性沉淀降解DNA释放 甲酰胺解聚法 哺乳动物基因组DNA分离纯化的一般技术路线 第二节 真核基因组DNA的分离纯化 第二节 真核基因组DNA的分离纯化 一、酚抽提法 二、甲酰胺解聚法 三、玻棒缠绕法 四、其它方法 五、DNA片段的纯化 六、DNA片段的回收 一、酚抽提法 1976年由Stafford及其同事创立，现在使用的是改进的方法 以含EDTA、SDS及RNase的裂解缓冲液裂解细胞 经蛋白酶K处理后，用pH8.0的Tris饱和酚抽提，获得DNA粗制品 一、酚抽提法 二、甲酰胺解聚法 1987年Kupiec等报道了甲酰胺解聚法，其中细胞裂解和蛋白质水解步骤同酚抽提法，但不进行酚的抽提。 三、玻棒缠绕法 玻棒缠绕法是在Bowtell(1987)方法的基础上经改进而来