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癌变 一变 突变 第 25卷 第 3期 -乙—-- 目■囵 shRNA在抗猪瘟病毒中 稳定遗传表达的研究进展 许小琴 ／宋学雄 ／黄天华 (1．汕头大学医学院生殖医学研究中心，广东 汕头 515041；2．青岛农业大学动物科技学院，山东 青岛 2661091 【摘要】RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是一种能特异性地介导同源基因沉默的现象，随着对其机制的深入了解，它在病 毒性疾病 的治疗和预防上发挥 出 日益重要的作用。本文介绍了RNAi的作用机制 ，干扰RNA载体短发夹RNAfshorthairpin RNA，shRNA)及其与转基因技术结合防治猪瘟病毒的作用，并从供体细胞类型的选择 、干扰RNA的设计 、位置效应及RNAi脱靶 效应4个方面对影SI~RNAi持续干扰猪瘟病毒复制的因素进行了综述。 【关键词 】RNA干扰；猪瘟病毒；转基因；位置效应；短发夹RNA 中图分类号：Q319．2 文献标识码 ：A 文章编号：1004—616X(2013)03—0239—05 doi：10．3969~．issn．1004—616x．2013．03．018 猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的一种高度接触性 、致死性传染 毒作用也为病毒性疾病的防控提出了新思路，有可能成为预防 病 ，临床上以高热、微血管变性所致的全身出血 、坏死 、梗塞 病毒性疾病的有效途径。 为主要特征 。猪瘟病毒系黄病毒科瘟病毒属成员，病毒粒子 RNAi是生物体 自身存在的防御病毒侵入作用的一种保护性 具有囊膜 ，完整的病毒粒子直径在40—50nm之间，基因组为 机制 ，在干扰病毒复制的同时并不会导致感染细胞发生损伤。 单股正链RNA，大小约12．3kb。病毒只有1个大的开放性阅读 由于RNAi可以高效、特异性地沉默特定基因，为病毒性疾病的 框架 (0penreadingframe，ORF)，编码病毒所有的结构蛋白和非 治疗带来 了希望。人们认识到RNAi是有效治疗病毒感染的手 结构蛋白。在宿主细胞内首先翻译成含有3898个氨基酸残基、 段，通过设计针对病毒RNA组分的siRNA或是针对病毒感染细胞 相对分子质量约438的多聚蛋白，并进一步在病毒蛋白酶和宿主 过程中所必需的辅助因子的siRNA，将其导入细胞，利用其特异 细胞信号肽酶的作用下加工成为多个结构蛋白和非结构蛋白 ， 性降解病毒核酸的效应阻断病毒的增殖过程 ，有效地解决了应 病毒基因依次被编码的顺序为Npro、C、ErnsfE0)、E1、E2、 用传统治疗方法抑制病毒复制时对宿主细胞的伤害，通过抑制 P7、NS2—3、NS4A、Ns4B、NS5A、NS5B。NS2—3可被加工成 致病基因的表达，达到治疗或预防病毒所致疾病的目的。 NS2、NS3(P80)，除C、E0、E1和E2为结构蛋白外，其余均为 但siRNA导人细胞后仍有无法克服的缺点，即在细胞内容 非结构蛋白。猪瘟在一年四季均可流行，主要通过呼吸道和消 易被降解，使得RNAi效应持续时间短。为避免这一缺点，短发 化道传染，给养猪业造成巨大经济损失。由于猪瘟的广泛传染 夹RNA(shorthairpinRNA，shRNA)~I起了研究者们 的注意 ， 性，使其成为严重威胁养猪业的疾病。目前尚无有效的治疗方 shRNA包括两个短反向重复序列 ，中间由1个茎环floop)序列分 法，因此预防猪瘟的发生尤为重要。 隔，组成发夹结构。人们可以根据靶标设计shRNA序列并将其 克隆到特定载体上 ，shRNA序列通过载体导入细胞后，其表达 1 RNAi干扰的作用机制及其在抗病毒 中的应用 构件可以在细胞内不断地转录出shRNA，并利用细胞内的酶切 RNA干扰 (RNAin