第五章第四节,补料分批操作反应器.pptVIP

* Shengbing Duan, Zhongping Shi, , Haojie Feng, Zuoying Duan, Zhonggui Mao An on-line adaptive control based on DO/pH measurements and ANN pattern recognition model for fed-batch cultivation Shi Z P et al. Biochemical Engineering Journal, 2006, 30(1):88–96. * Min-Jie Gao Zhi-Yong Zheng Jian-Rong Wu Shi-Juan Dong Zhen Li Hu Jin Xiao-Bei Zhan Chi-Chung Lin. Improvement of specific growth rate of Pichia pastoris for effective porcine interferon-α production with an on-line model-based glycerol feeding strategy Appl Microbiol Biotechnol (2012) 93:1437–1445. * ?kesson M, Karlsson E N and Hagander P, et al. On-line detection of acetate formation in Escherichia coli cultures using dissolved oxygen responses to feed transients. Biotechnology and Bioengineering. 1999, 64:590-598. 在供氧充足的条件下，当大肠杆菌比摄糖速率qg超过一定的临界值qgcrit时(图4-2A)，就会产生乙酸[4,5]。这是因为葡萄糖的摄入速率大于TCA循环的周转能力或细胞的呼吸能力而使中间产物乙酰辅酶A通过乙酰磷酸途径产生乙酸。在分批补料或连续培养过程中，当乙酸开始产生后，大肠杆菌的比摄氧速率qo也达到最大值[13]。比摄糖速率、比摄氧速率与乙酸产生的关系如图4-2A所示。在葡萄糖限制培养的条件下，脉冲补入的葡萄糖使大肠杆菌的比摄糖速率增加，当比摄糖速率低于临界值(qgcrit) 时，大肠杆菌的比摄氧速率也随之升高，这种变化就能通过pO2值的降低显示出来。而脉冲过后，随着葡萄糖浓度的下降，比摄糖速率也下降，pO2值也逐渐回升(图4-2B)。但是当脉冲补入的葡萄糖过多，大肠杆菌的摄糖速率超过临界值时，即超过TCA循环的周转能力时，涌向TCA循环的代谢流向乙酰磷酸途径溢流而产生乙酸，大肠杆菌的摄氧能力处于饱和状态，同时pO2值的响应就不会随着葡萄糖的脉冲补入而产生振荡变化。因此根据pO2值对葡萄糖脉冲补入产生信号的不同就可以定性地判断当前的补料过程是否会促使大肠杆菌产生乙酸，也为在线调整补料速率提供直接的依据。 * * * * * * * * §5.4补料分批操作反应器 F Si VR S X P 恒速补料 指数补料 变速补料 在反应过程中不断向反应器中加入基质，但又不同时取出培养液的操作方法 杂菌污染机会小 能解除底物抑制 易控制发酵过程 定值控制补料 * 反应器中的培养体积在不断地变化，组分的浓度也是随时间变化，因此衡算往往以总量变化来进行操作方式：分批培养使底物将耗尽时，补料开始进行。 补料分批操作 * 假设：基质的消耗仅用于合成菌体 分批培养阶段： 分批培养阶段结束时，初始底物被耗尽， 则 初始底物浓度 * 细胞的总量为： 培养体积变化： V0：初始培养体积(L) 细胞浓度： 因此， F：流加速率(L/h) * §5.4.1　对于恒速补料过程 F=constant D S μ X 进入拟稳态的前提条件： 拟稳态 D=μ Si:补料液中的基质浓度 S1:分批培养结束时的基质浓度 X1:分批培养结束时的细胞浓度 进入拟稳态时：D=μ t * 在Si很大而F很小时，即以很小的流率以很浓的基质作为补料液时，则μD,细胞的生长速率受流加速率控制，这在实际操作中是经常用到的。 在进入拟稳态后，细胞的生长进入基质限制生长状态，在这个过程中由于VR在不断变化，因此D在变化，μ也是随着时间而变化的。 * 对数补料高密度培养重组大肠杆菌的过程 指数补料的应用实例 * §5.4.3参数定值控制 pH-stat法： 通过pH检测与底物流加关联控制，使pH保持恒定。 影响培养液pH的物质： 通过碳源和/或氨水作为pH调节剂，流加入反应器。 其它反馈控制 检测基质浓