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小鼠白介素6elisa试剂盒说明书 小鼠白介素-6 ELISA检测试剂盒 日本IBL进口原装 货号:27768 规格 前言简介 白介素6是一种细胞因子,已被证实为B细胞分化因子.它是一种抗体形成系统,它的生理特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的生长刺激等,也备受关注. 并且已证实白介素-6与病理学存在稳定的相关关系.例如,报道多种疾病的生长因子为白介素-6, 骨髓瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体.此外, 白介素6在多种炎性疾病和自身免疫疾病发挥重要的作用. 此试剂盒能高灵敏度的检测小鼠血清和细胞基质上清的白介素6 原理 此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠的白介素-6的量成正比. 检测范围 10.94 预期用途 ■此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测 试剂盒成分 1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T 2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1 3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2 4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1 5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1 6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1 7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1 8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂) 2准备 1) 洗涤液的准备 试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,用1950 mL去离子水稀释50 mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液. 置于冰箱内可保存2周. 2) 酶标记抗体的准备 试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量,用标记抗体稀释液稀释30倍. 示例: 如果你用一条板(8孔),就需800 μL.的标记抗体.就用870 μL的标记抗体稀释液稀释30 μL抗体浓缩液,充分混匀.并每孔各加100 μL 浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验 剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4°C 3) 标准品的准备 加0.5 mL的去离子水到瓶装标准品,制成浓度为1,400 pg/mL小鼠白介素-6标准品液 4) 标准品的稀释 准备8支试管,并每支各加230 μL EIA缓冲液.稀释成如下浓度, 步骤如下图所示: 试管1 700 pg/mL 试管2 350 pg/mL 试管3 175 pg/ mL 试管4 87.5 pg/mL 试管5 43.75 pg/mL 试管6 21.88 pg/mL 试管7 10.94pg/mL 试管8 0 pg/mL(样品空白对照) 吸取230ul的标准品液于1号管混匀然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀如下图所示,按此规律稀释系列标准品浓度范围为10.94-700 pg/mL,第8号管为0 pg/mL作为样品空白对照 5) 样品稀释 样品如需稀释时,必须用EIA缓冲液进行稀释 如果样品中小鼠白介素-6的浓度范围一无所知的话,预先准备几个不同稀释浓度的样品液来确定最佳的检测浓度. 3实验步骤 使用前将所有试剂应平衡至室温大约30min充分混匀确保试剂质量无改变标准曲线和样品检测必须同时进行. 试剂 待检测样品 标准品 样品空白 试剂空白 检 测 样 品100ul 稀释标准品1-7管100ul EIA缓冲液第8管 100ul EIA缓冲液100ul 盖板于4°C下温育过