短发夹状RNA干扰bcl-2后诱导人晶状体上皮细胞凋亡的实验研究.pdfVIP

·636· 生堡堕叠盘查!塑生!旦筮箜鲞筮!羽g丛!』亚!型趔：』坐!堂，Y吐箜，塑垒! ．论著． 短发夹状RNA干扰bcl一2后诱导人晶状体 上皮细胞凋亡的实验研究 吴新华卢奕方艳文蒋永祥田洁 【摘要】 目的应用RNA干扰技术抑制人品状体上皮细胞(HLEC)bel-2基因表达，观察诱导其 细胞凋亡情况，为防治品状体后囊膜混浊提供新的策略。方法实验研究。设计2条以bcl-2基因为 靶标的短发夹RNA(shRNA)，克降入质粒PG,Csi表达载体，分别命名为P1、P2，经脂质体转染入永生 性HLEC系SRAOI／04，48h后检测转染效率和bol-2的基因及蛋白表达情况，并检测HLEC的细胞凋 亡情况。多组间及组间计数资料的比较，采用随机区组设计的方差分析。结果 重组质粒经自动基 因测序仪测序，证实构建成功。转染后48h，流式细胞仪测得Pl、P2转染率为44．1％、47．2％。免疫 印迹法测得Pl、P2组的hel-2蛋白表达较对照组降低，实时荧光定量聚合酶链反应法测得Pl、P2组 的bd-2 mRNA相对表达量为0．435、0．476，较对照组降低(F=1672．4，P0．05)，流式细胞仪双染法 测得Pl、P2组HLEC的细胞凋亡率分别为42．3％、45．4％，较对照组增加(F=1756．2，P0．05)，并 且活化型caspase-3蛋白的表达增加。结论Pl、P2可抑制HLEC的bcl-2基因表达，并诱导HLEC凋 to(中华眼科杂志．2009，45：636-．640) 【关键词】 白内障；RNA干扰；晶体；上皮细胞；基因，bcl-2；细胞凋亡 Inhibitionofbcl-2shRNAtoinduce inhumanlens cells by apoptosis epithelial WU盛，1．hua． LU andEN．r Yi，FANGYan-wen，JlANc of Yong—xiang，TIANJie．DepartmentOphthalmology，Eye 20003 l。China Hospital．FudanUniversity．Shanghai autho’：LU CorrespondingYi，Email：luyi0705@yahoo．com．cn To whether ofhumanlens 【Abstract】Objectiveinvestigate cells(HI．EC)can apoptosis epithelial he bcl-2 inducedinhibitionof shRNA．MethotisIt w勰an of by experimentalstudy．Twopairs were andinsertedinto Pccsito shRNA oligonucleotidessynthesized plasmid generate eukaryoticexpression PlandP2．At48hoursaftertransfectionjn Vecto璐，named HLEC(SRA01AM)withLioofectamine…2000， thewholecell wasextractedanddetectedWesternbloLnebel-2 wasdetectedbv protein by mRNAlevel real-timePCR111e ofHLECs