水稻花药绒毡层特异基因及减数分裂相关基因的分离与功能分析研究.pdfVIP

中 文 摘 要 利用RNA减法杂交、差异筛选和5-RACE等方法从水稻分离到了一花药绒毡 层特异表达的基因 R,439aSouthern杂交表明，RA39在水稻基因组中是以单拷 贝的形式存在的。RT-PCR结果初步表明，RA39是一水稻花药特异表达的基 因。RNA原位杂交进一步表明，RA39主要在水稻花药的绒毡层中表达，而且在 小袍子母细胞减数分裂期和四分体时期表达量最高。RA39cDNA全长1013bp, 编码 298个氨基酸残基。RA39cDNA与数据库中的已知序列没有明显的相似 性，由其推测的多肤与核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingprotein, R工P)的序列相似在 19-34%之间。多重序列排列分析结果表明构成RIPs活性位 点的5个关键氨基酸残基在RA39中是保守的，在蓖麻毒蛋白中分别为Tyr, Tyr13,Glu,Ar岁。andTr沪，。利用原核表达系统，通过蛋白质分离和纯 化获得了在SDS电泳图谱上为单一条带的纯的RA39蛋白，用兔rRNA作底物进 行的酶活性分析证明该蛋白有N一糖基化作用，是一种类型工的核糖体失活蛋 白。反义转基因植株的花粉用 TTC进行活性染色结果显示其活性明显减弱，成 熟的TO代反义转基因植株的结实