5氨基乙酰丙酸的制备与应用研究综述研究.pdfVIP

H030 5-氨基乙酰丙酸的制备与应用研究综述1 林建平 岑沛霖 ( 江大学材料与化学工程学院生物工程研究所，浙江 杭州 310027) 5-氨基乙酰丙酸（5-aminolevulinic acid, 简称ALA ）广泛存在于各种动物、植物和细菌 中，是四吡咯类化合物 （如叶绿素，血红素，维生素B12等）生物合成的共同前体。ALA在细 胞内会缩合成为原卟啉（protoporphyrin IX ，PPIX ），PPIX被光激活时会产生单重态氧。由 于单重态氧具有十分活泼的生物活性，ALA在医学及农用化学品领域具有广泛的用 ，近年 来已经引起国际学术界和工业界的浓厚兴趣。 在医学领域，ALA具有选择性杀死癌细胞的作用，被称为第二代光动力药（Photodynamic medicine ），具有许多显著优点。在治疗皮肤癌时，将含ALA 的药物涂布于患处，细胞将利 用ALA合成PPIX ，后者能迅速地向肿瘤细胞集中，这时用光照射，产生的单重态氧就能将 高达86%的肿瘤细胞杀死。美国FDA 已于1999年底正式批准ALA用于皮肤癌前期的治疗， ALA在治疗其它表皮癌症中的应用也倍受关注。 在农业领域，ALA具有除草、杀虫、落叶和促进植物生长等多种功能，而且对人畜无 毒，在环境中易降解、无残留，因而被认为是一种应用领域广阔、极具发展前 的无公害绿 色农用化学品。用高浓度ALA处理后，植物细胞会迅速积累PPIX ，在光照下，PPIX产生单 重态氧会氧化不饱和脂肪酸，从而破坏植物细胞。由于单独使用ALA 的除草效果没有化学 除草剂那么强，一般都将其与NIP （2,4- dichlorophenyl-4-nitrophenyl ether ）等除草剂联合使 用，可以显著提高除草效果。低浓度的ALA还具有促进植物光合作用，增强植物的抗逆性 的功效。用30 100 mg/l ALA处理的棉花秧苗，可以在含1.5% NaCl的土壤上生长。0.1 1.0 mg/l 的ALA可以使水稻在5°C下的存活率提高40- 50% 。 ALA 可以采用化学合成的方法制备，而且已经开发出多种合成工艺，但这些工艺的副 反应多、收率低、成本高、环境污染较严重，因此，目前化学法只能少量生产ALA 以满足 医疗领域的应用，其价格非常昂贵。相对化学合成而言，微生物发酵生产ALA 具有环境友 好、原料为可再生资源、提高生产水 的潜力大等显著优点，因而受到许多研究者的青睐。 近年来国际上对 ALA 的生物合成的研究日益重视。生物体内ALA 合成的主要 径有 C4 径和C5 径两种。前者以琥珀酰CoA 和甘氨酸为前体一步合成ALA，后者则以谷氨 酸为前体经过三步反应生成ALA 。由于C4 径相对比较简单，目前生物法产ALA 的研究 多集中在利用该 径上。国际上正在研究的ALA 制备方法主要可分为两类：一是光合细菌 和藻类培养；二是利用重组微生物发酵。前者最成功的例子是，日本研究者花费了十余年时 间，利用多轮诱变育种和培养条件的优化使球形红细菌发酵的ALA 的产量提高到7g/L 以上， 国家自然科学基金资助 （No. 该工艺的优点是培养基成本较低，但培养过程需要严格控制反应体系的氧化还原电位，过程 控制非常困难，且发酵时间也较长。该法的另一缺点是，大量研究表明，要采用球型红细菌 进一步提高ALA 产量似乎极为困难。另外一类方法是利用经过代谢工程改造的大肠杆菌发 酵，其培养基成本略高，但发酵周期短，目前国际上报道的ALA 产量也可达到3-5g/L ，而 且还有进一步提高的趋势。 与国际上近年来对ALA 的高度重视形成鲜明对比，国内目前有关ALA 的研究还很少， 化学合成的研究仅有西安交通大学的一篇专利报道，应用方面，也仅有西安交通大学申请了 两个相关的专利。在ALA生物合成方面，除本实验室的工作外，国内公开的报道仅有浙江 大学刘秀艳等开展了光照条件下利用红细菌属和红假单 菌属微生物生产ALA 的研究，最 高的产量仅为22 mg/L 。 有鉴于此，作者所在的实验室分别从传统的菌种选育和代谢工程两个角度开展了ALA 生物合成的研究。在传统的育种方面，从杭州四堡污水处理厂的活性污泥中分离筛选得到数 株在黑暗环境中产ALA活性较高的红细