第四章灭菌及染菌的防治.ppt

一、定义： 灭菌是指用物理的或化学的方法杀灭或除掉物料及设备中所有生命有机体的过程。 二、工业灭菌分类 第一节 概述 １.物理灭菌：高温、辐射、过滤灭菌 ２.化学物质灭菌：化学药剂 １.物理灭菌 （1）干热灭菌：干热空气或火焰 干热空气灭菌 生产上常用的灭菌条件为160-170℃、1.5h以上。 火焰灭菌： 主要用于金属接种工具、试管口、锥形瓶口、接种移液管和滴管外部灭菌。 特点：时间长、耗热量大，应用不广。 应用：一般用于灭菌后要求保持干燥状态的物料。 （2）湿热灭菌－蒸汽灭菌 　　用高压蒸汽将物料升温到115－140℃保持一定时间。常用的灭菌条件是120℃，20－30min。 优点： ①微生物对干热的耐受比湿热大得多 ②湿热蒸汽有潜热 ③湿热对微生物细胞具有强大的穿透力 应用：广泛用于物料或设备容器的灭菌。 热阻指标：杀灭芽孢杆菌的温度和时间 　常见热阻指标： 115℃，30min 120 ℃，15min 130℃，30min （3）射线灭菌 方法： 通常用紫外线、高能量的电磁波或粒子辐射灭菌。其中以紫外线最常用。 原理：紫外线的作用光谱与细菌体内核酸的吸收光谱相一致，DNA链上核苷酸的碱基因此具有强烈的吸收紫外线的能力，引起DNA结构形式的变化而导致死亡。 特点：紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但其穿透力极低 应用：只能用于表面灭菌。主要用来进行一定空间内空气的灭菌（如无菌室等）。 （４）介质过滤除菌 定义：采用过滤介质，如滤膜，过滤器等过滤 原理：过滤介质的孔径一般很小，不能用于培养基或设备等　　 　　　的灭菌． 应用：少数澄清的液体成分 　　　发酵过程中所用的大量无菌空气 ２.化学灭菌 定义：化学药剂灭菌是通过药剂与微生物细胞接触而发生诸如蛋白质变性等作用而达到杀灭微生物的目的。 化学灭菌的优点： （1）杀菌谱广，有效浓度低且杀灭微生物的速度快。 （2）性质稳定，易溶于水且可在常温下使用。 （3）无腐蚀性，无毒或低毒，使用安全。 （4）效率低，易残留，损耗大。 常用的化学药剂：乙醇、甲醛、苯扎溴铵（新洁尔灭）、戊二醛、环氧乙烷、漂白粉和苯酚（石炭酸）等。 用途：化学灭菌主要用来进行皮肤表面、器具及无菌区域的灭菌，很少用于培养基的灭菌。 第二节 培养基及有关设备的灭菌 工业上对培养基及有关设备的灭菌多采用湿热机蒸 汽灭菌．具体包括： 　　实罐灭菌（实消） 　　空罐灭菌（空消） 　　连续灭菌（连消） 　　附属设备灭菌 一、实罐灭菌（分批灭菌） 　　　分批灭菌是将配制好的培养基分批投入发酵罐中，经过间接蒸汽预热后，直接通入饱和蒸汽使培养基和设备一起灭菌。 流程： 培养基预热 → 培养基灭菌 → 冷却 过程： 1．培养基预热：将各排汽阀打开，蒸汽由蛇管或夹套引入，温度80～90℃。 　目的：防止培养基与蒸汽温差过大，产生冷凝水稀释培养基或泡沫急增。 2．培养基灭菌：将蒸汽由进气口、进料口、取样口等导入罐内， 120 ～130℃，保温30min。 　目的：使罐内液体翻动剧烈，物料达到均一的灭菌温度。 3．冷却：灭菌将要结束时，应立即引入无菌空气以保持罐压，然后开夹套或蛇管冷却水冷却． 　目的：避免罐压迅速下降，产生负压而抽吸外界空气。 　　进气口、进料口、取样口等进蒸汽 二、 空罐灭菌（空消） 　空罐灭菌即发酵罐罐体的灭菌。 　由进汽阀引入蒸汽，空罐灭菌一般维持罐压1.5×105～2.0×105Pa，罐温125～130℃，30～45min。 　灭菌后为避免罐压急速下降造成负压，要等到经过灭菌的无菌培养基输入罐内后，才可以开冷却水冷却。 三、 连续灭菌（连续灭菌） 　培养基通过连续灭菌装置，进行快速这续加热灭菌，并快速冷却，再立即输入预先经过空罐灭菌后的发酵罐中。 流程： 培养基预热 连续灭菌 维持灭菌温度 冷却 培养基预热 连续灭菌 维持灭菌 　　　　　　　　冷却 过程： 1．培养基预热：60－75℃，避免连续灭菌时由于料液与蒸汽温度相差过大。 2．连续灭菌：连消塔中高温蒸汽连续灭菌，温度一般以125－135℃，时间5min左右为宜。 3．维持灭菌温度：利用维持罐使料液在灭菌温度下保持5—7min，蒸汽100℃， 4-5×105Pa,以达到彻底灭菌的目的。 4．冷却：采用冷水喷淋时，喷淋前冷却管内应充满填料。 特点： （1）连续灭菌的时间短、温度较高。培养基受到的破坏较少