上海市结核病实验诊断操作规程PPT.ppt

一、室内质量控制-涂片镜检 每新进一批试剂及每次进行涂片染色检查时，需同时染色、阅读一张阳性及一张阴性涂片。 涂片可预先准备，热固定后不染色，4℃储存于密闭的容器内。 用临床标本离心沉淀制备的涂片质控片最佳。如无临床标本，也可使用戈登分枝杆菌制备阳性质控片，大肠埃希菌制备阴性质控片。 定期记录、审核涂片结果，出现下列情况时需要注意： 指定病人人群的阳性及阴性涂片率升高； 不同病人标本出现连续涂阳； 涂阳标本无分枝杆菌生长 涂阴标本固体培养基上分枝杆菌生长，2+或以上。 室内质量控制-涂片镜检 实验室要有成文的质控程序，需记录所有QC试验的结果。失控时，应有恰当的纠正措施，并记录结果。 所有培养基和试剂需要记录批号、有效期。购买的商品培养基，实验室需保存供应商提供的相应培养基QC。 实验室可建立不同检验结果参数的正常平均值，定期监测这些参数以控制实验过程的质量。 室内质量控制-培养 固体药敏试验：培养基质量控制：需监控培养基的外观、颜色、质地、凝固性、均质性。含药培养基无菌试验，采用同一批次的不含药培养基抽取5%进行无菌性测试。 药物纯粉：药敏试验应使用厂家提供的药物标准粉或纯粉，并从厂家获得药粉的效价和纯度。 含药培养基保存：培养基应在冷藏环境下置于密封袋内保存，保存期空白培养基不超过2个月。异烟肼可室温保存，链霉素、乙胺丁醇、卡那霉素、丁胺卡那应冷藏保存，卷曲霉素和利福平应冷冻保存。 商业化液体药敏试验：遵循商家说明书进行。 室内质量控制-药敏试验 二、室间质量评估 结核病实验室所有临床服务项目每年应当参加卫生部、上海市临床检验中心或上海市疾病预防控制中心组织的相关的能力验证和/或室间质评项目，且须符合要求，如无以上项目，可采用实验室间比对来判定分析试验的可靠性，每年至少两次。 痰涂片镜检结果质量要求，涂片阴性符合率95%以上，涂片阳性符合率98%以上，总符合率96.5%以上。“1+”以上的阳性涂片不允许出现假阴性。 第三章 技术规范 第一节 基本技术要求 该部分内容系结核分枝杆菌检验基本技术，适用于非定点医院结核检测实验室。 一、标本采集、运送及贮存 痰液：收集患者深部咳出痰置于无菌容器中（最小量3ml）。1h不能送检，冷藏。 血液：无菌方法采集10ml全血（成人最少量为5ml,儿童1ml） 。不宜冷藏冷冻。 体液：无菌方法采集10ml～15ml 液体于无菌管中。液体量尽量多，不要用棉签蘸取体液送检。 1h不能送检，冷藏。 脓液标本： 1h不能送检，冷藏。 深部脓液：采用无菌方法，用注射器抽取脓液和/或采集组织。 开放性损伤标本：应尽可能从溃疡基底部或边缘部采集，无菌采集组织标本。 二、病原学检测方法 （一）涂片染色-样本准备 一张载玻片上只能涂抹一份标本。 每张载玻片只能使用一次，不得清洗后再次用于涂片检查。 应使用以95％乙醇擦拭（或浸泡）脱脂，经干燥、清洁、无油污、无划痕的新载玻片制备涂片，在载玻片一端有磨砂面上用铅笔在上面直接书写病人姓名、标本送检日期、标本检验号。 在生物安全柜中小心打开承载标本的容器，防止产生气溶胶或标本外溢。 直接涂片法样本准备 用折断的竹签茬端挑取痰标本的脓样、干酪样部分约50～100μl，于玻片正面的右侧2/3中央处均匀涂抹成2cm×1cm椭圆、厚薄适度的涂片，置于烤片机上烘干，备染色用。 涂片染色-样本准备 离心沉淀法样本准备 高压浓缩： 将标本放入10ml耐高压带螺旋口的无菌管中，1:1加入生理盐水。121℃高压20分钟。 将标本管放入带内盖的离心机中，3000g离心15分钟后，取沉淀涂片。 涂片都须放在生物安全柜中40±5℃烤片机上烘干固定，时间≥1小时。 溶痰剂浓缩： 将溶痰剂与痰液按约（1～3）：1的比例加入痰瓶中，竹签打匀，至痰中黏液完全液化，浊度为1个麦氏单位左右。3000g，离心10min，弃去上清液，取沉淀物50-100μl制成2cm×1cm椭圆、厚薄适度的涂片，置于烤片机上烘干备用。 涂片染色-样本准备 萋尼抗酸染色程序（冷染） 加石碳酸复红溶液，盖满痰膜，染色5分钟或更久（不需加温步骤，染色期间应始终保持痰膜被染色液覆盖，必要时可续加染色液）。水洗（之后尽可能将水分沥干或以滤纸吸干）。 加酸性酒精溶液，脱色2分钟；如有必要，需流水洗去脱色液后，再次脱色至标本无可视红色为止水洗。 加亚甲基蓝溶液染色30秒，水洗、干燥。 镜检（300个视野）。 一张合格的染色玻片，由于被亚甲兰染色而呈亮蓝色。将染色后的玻片放置在报纸上，如果透过痰膜不能分辨报纸上的文字，则表明该玻片过厚。 （二）涂片染色-萋尼染色 萋尼抗酸染色程序（热染） 　抗酸性杆菌胞壁含有类脂质，一般不易着色，用强染剂（5%石炭酸复红溶液）加温或延长染色时间，可使其着色