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流式细胞仪计数网织红细胞方法评价
精品论文 参考文献
流式细胞仪计数网织红细胞方法评价
王赛赛
(温州医科大学附属第三医院瑞安市人民医院 325200)
【摘要】目的 探讨和评价流式细胞仪在网织红细胞计数中的应用。方法 选取2013年7月在我院住院治疗的29例恶性肿瘤患者,抽取静脉血1ml,选取同期贫血患者32例,健康志愿者30例,抽取静脉血1ml,加入噻唑橙(TO)染色液,采用流式细胞仪计数红细胞,对其中的网织红细胞所占的比重进行分析和研究,比较与手工法的计数效果,观察其稳定性、重复性及相关性。结果 计数结果显示,采用流式细胞仪计数网织红细胞数与手工法计数结果之间没有明显的差异,批内CV(变异系数)在3.23%以下,批间CV(变异系数)在4.86%以上。结论 采用流式细胞仪进行网织红细胞的计数,具有更准确、更快速、重复性好、更客观的特点,具有较高的临床应用价值,值得在临床网织红细胞常规检测中推广。
【关键词】流式细胞仪 网织红细胞 计数方法评价
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2014)05-0180-01
在骨髓红细胞系统造血功能的判断以及贫血患者疗效观察中,网织红细胞具有重要的价值,我院选用流式细胞仪进行网织红细胞的计数,效果满意。现报道如下。
1. 资料与方法
1.1 一般资料
选用2013年7月在我院住院治疗的恶性肿瘤患者29例,其中有6例肺癌患者,7例肝癌患者,7例胃癌患者和9例乳腺癌患者;同期贫血患者32例,其中有4例巨幼细胞贫血患者,11例溶血性贫血患者和17例缺铁性贫血患者,Hb30-100g/L;另取30例健康志愿者,年龄在20-45岁之间,男性血红蛋白(Hb)大于130g/L,女性Hb大于110g/L。
1.2 方法
本组所有研究对象,均抽取1.0ml的静脉血,然后加入装有EDTA抗凝剂的测定管中,混匀待用。在甲醇中,溶入TO染料,调配到1mg/ml的浓度,作为贮存液保存到零下20摄氏度的条件中。将贮存液稀释为工作染液,浓度由原来的1mg/ml到100ng/ml,稀释时采用含有2mmol/L的PH7.4PBS的EDTA以1:10000的比例进行操作。在测定管中依次加入1mlPBS、5mu;l抗凝全血、1mlTO染液,混匀后在避光、室温环境下进行孵育,时间设为60分钟,同时对阴性对照管进行相同操作。
采用EPICS2XL流式细胞仪获取分析用红细胞100000个,流速为每秒5436个细胞,门采用SSLog、FSLog来设定,A区为红细胞,结果采用直方图进行统计,待测样本的网织红细胞百分数则为测定管值与对照管值之差。
1.3 统计学方法
t检验;相关性检验;线性回归分析;Plt;0.05,差异显著,具有统计学意义。
2. 结果
对所采集样本抗凝血分成两份进行了稳定性试验、重复性试验和相关性试验。稳定性实验中分别在30min、60min、90min等几个设定时间,20-23摄氏度、4摄氏度的不同室温下,分别进行了计数,发现网织红细胞数在染色30分钟时较低,结果大概在4摄氏度的90min之后,或者是25摄氏度的60min之后才达到基本稳定。重复性试验操作,连续测定10次的网织红细胞变异系数(CV)和采用流式细胞仪计数网织红细胞3次均值分别为3.23%和4.86%;所选的29例恶性肿瘤患者、32例贫血患者和30例健康志愿者的样本,同时采用流式细胞仪和手工计数两种方法进行网织红细胞计数,经相关性统计学处理,流式细胞仪计数网织红细胞为手工计数网织红细胞的1.08倍再加上0.0035,相关系数为0.89。流式细胞仪对所选研究对象进行网织红细胞计数,肿瘤患者组、贫血患者组分别与健康志愿者组相比,差异显著,且Plt;0.05,具有统计学意义。详见表1。
表1 肿瘤患者组、贫血患者组、健康志愿者组的Ret%比较表
组别 肿瘤患者组 贫血患者组 健康志愿者组
例数 29 32 30
Ret% 2.43plusmn;0.62 3.06plusmn;1.12 1.21plusmn;0.55
3. 讨论
流式细胞仪它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。流式细胞仪主要由流动室和液流系统、激光源和光学系统、光电管和检测系统和计算机和分析系统组成。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位
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