pEGFP-N1-TNFα表达载体的构建与鉴定研究.pdfVIP

第34卷第2期 西 安 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vo1．34No．2 2013年 3月 JournalofXi’anJiaotongUniversity(MedicalSciences) M ar．2O13 pEGFP—N1一TNFa表达载体的构建与鉴定 任艳鑫，赵 留芳，杨 洁，孙瑞梅 ，王 虎，李晓江，隋 军 (昆明医科大学第三 附属医院头颈肿瘤研究中心，云南昆明 650118) 摘要 ：目的 构建 pEGFP—N1TNFa重组质粒并鉴定，为转导 CIK细胞并定位表达奠定基础 。方法 以pMD19Sire— pieT—TNFa为模板 ，PCR扩增 TNFuCDS区片段 ，将 PCR产物进行 15g／I琼脂糖凝胶 电泳，并 回收 TNFa条带，用 BglⅡ和HindBI将 TNFa的PCR片段及 目的载体 pEGFP—N1双酶切，然后进行连接。连接产物转化至DH5a中。挑 取克隆，提质粒，进行鉴定