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现代组织化学技术 (Modern Histochemical Technology) 现代组织化学的内容 1、经典组织化学 2、免疫组织化学 3、原位杂交组织化学 4、定量组织化学 组 织 化 学 （Histochemistry ） H­E染色 一、组织化学的基本概念 （一）组织化学的提出 （二）组织化学的定义 在保持组织或细胞基本上不改变其生活状 H­E染色 态时的微细结构的条件下，采用显微镜技术观 察某些化学成分或酶活性在组织或细胞内的定 性、定位和定量及其变化规律 定性，定位，定量; 组织原位，显微镜 醛复红染色 铅法（ATP酶） 一、组织化学的基本概念 （三）组织化学的基本原理 化学反应 化学试剂 + 拟检物质 反应产物沉淀 （有色） （组织切片或细胞涂片） （拟检物质所在处） （四）组织化学技术的用途 二、组织化学标本的制备 (一) 组织的固定 1、固定的目的： 1 ）保持组织细胞原有的形态结构 2 ）使组织硬化 2 、固定的优、缺点： 优点：使组织细胞的形态结构得到保持 缺点：拟检物质反应性减弱，酶的活性 易受损 二、组织化学标本的制备 3 、常用固定剂 1 ）甲醛： HCHO 40% 甲醛溶液的商品名称为福尔 马林，10%福尔马林常用作固定剂 多聚甲醛: （HCHO)n ，n=8〜100 4%多聚甲醛溶液常用，用磷酸盐缓冲液配制 2 ）戊二醛：C H (CHO) 3 10 2 2〜4%戊二醛溶液，较好的保存细胞的超微结构，但 是保存酶活性效果不佳 3 ）乙醇：CH CH OH 3 2 80% 乙醇溶液， 较好的保存酶活性和糖原，但会使组织 严重收缩和硬化，常与其它固定剂混合使用 （二）组织切片的制备 1、石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（梯度酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（石蜡切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序 （二）组织切片的制备 石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（梯度酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序 （二）组织切片的制备 石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序 （二）组织切片的制备 石