深部感染真菌种类鉴别的微生物检验.docVIP

精品论文 参考文献 深部感染真菌种类鉴别的微生物检验 杨凤云 （黑龙江省哈尔滨木兰县疾病预防控制中心　151900） 【中图分类号】R37 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）13-0156-02 1 白色酵母菌 白色假丝酵母菌通常存在于人的口腔、上呼吸道、肠道和阴道黏膜上，当机体发生正常菌群失调或抵抗力降低时，可引起各种念珠菌病。 1.1 生物学特性 白色假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径3～6mu;m。革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。 1.2 微生物检验 (1)标本直接检验 1)直接镜检 取脓汁、痰和局部炎性分泌物直接涂片，革兰染色后镜检。显微镜下见到革兰阳性、圆形(或卵圆形)菌体或孢子及假菌丝，即可确认假丝酵母菌感染。 2)抗原检测 取病人血清做ELISA、免疫印迹等法检测白色假丝酵母菌抗原。 3)核酸检测 用PCR法将假丝酵母菌DNA分子扩增后以分子探针检测，具有较好的敏感性和特异性。 (2)分离培养与鉴定 1)普通培养 将标本接种于沙氏培养基上25℃或37℃培养1～4天后，培养基表面可出现奶油色类酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。 2)芽管形成试验 将假丝酵母菌接种于0.2～0.5ml人或动物血清中，37℃孵育1.5～4h，镜检观察有无芽管形成。白色假丝酵母菌可形成芽管，但并非所有假丝酵母菌都形成芽管，其他假丝酵母菌一般不形成芽管。试验时应设置阴性对照(热带假丝酵母菌)和阳性对照(白色假丝酵母菌)。 3)糖同化或发酵试验 假丝酵母菌，凡能发酵某种糖，一定能同化该种糖，故只需做那些不被发酵糖的同化试验。将培养物接种于糖发酵管，25℃孵育，一般观察2～3天，对不发酵管或弱发酵管可延长至10天或2～4周。同化试验所有的基础培养基含有(NH4)2 SO4、KH2PO4、MgSO4?7H2O、CaCl2?2H2O、NaCl和酵母浸膏，试验时分别加入各种糖。同时以葡萄糖和基础培养基作对照。观察结果时要观察有无酵母生长或液体培养基是否变混浊。 2 热带假丝酵母茵 热带假丝酵母菌广泛分布于自然界，在人体表和外界相同的腔道中也存在，它可引起皮肤、黏膜和内脏假丝酵母菌病，而且其产生的毒素可引起过敏反应及组织损伤。 2.1 生物学特性 热带假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径3～6mu;m。革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝。 2.2 微生物检验 (1)标本直接检验 1)直接镜检 将标本作涂片革兰染色后镜检，观察革兰阳性的假丝酵母菌。 2)分离培养于鉴定 将标本接种于沙氏培养基上形成色暗而干燥的菌落，取菌落作TZC反应。TZC反应即在葡萄糖蛋白胨琼脂内加入0.05g/L氯化三苯四氮唑(TZC)，热带假丝酵母菌在此培养基上生长后使培养基变为深红色或紫色，而白色假丝酵母菌没有此现象，其他假丝酵母菌使培养基变为红色。芽管形成较迟(血清中6h以上)，不形成厚膜孢子、动物试验阴性。 3 隐球菌 隐球菌属包括17个种和7个变种，其中仅新型隐球菌及其变种有致病性，新型隐球菌广泛分布于自然界，也可存在于人体体表、口腔和肠道中。本菌属外源性感染，经呼吸道侵入人体，由肺经血行播散时可侵犯所有脏器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜，也可侵犯皮肤、骨和关节。新型隐球菌病好发于细胞免疫功能低下者，如AIDS、恶性肿瘤、糖尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者。 3.1 生物学特性 新型隐球菌在组织中呈圆形或卵圆形，直径一般在4～6mu;m，外周有宽厚荚膜，荚膜较菌体大1～3倍，折光性强，一般染色法不易着色而难以发现而得名。 新型隐球菌有明显的生物学多态性，有A、B、C、D四个血清型，在沙氏培养基上形成白色至奶油色粘稠菌落。 3.2 微生物检验 (1)标本直接检验 1)直接镜检 用病人脑脊液作墨汁负染色检查，在黑色背景下可镜检到透亮菌体和宽厚荚膜。非致病性隐球菌无荚膜。 2)抗原检测 用乳胶凝集试验、ELISA、和单克隆抗体法等免疫学法检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原。 3)核酸检测 临床可用脑脊液、支气管吸出物等，以DNA探针法检测，所用探针和引物选自其保守区的重复序列，具有高度特