大丽轮枝菌致病类型及其分子指纹分析研究.pdfVIP

大丽轮枝菌致病类型及其分子指纹分析 朱有勇’ 王云月 ‘Dibbag.S.MultaniBruceR.Lyon Vii南农业大学云有有植物病理，点实脸室，昆明650201, 澳大利互悉尼大学生命科学李碗分子趁传学实脸室，悉尼2006) 怪要 本试扮进行了20个大丽转杖蔺泊株的致病性侧定和RAPD相统扩嘴，完成了供试曲株致病灸拜 与其RAPD指纹妞问的相关性分析。枯果表明，根据20个幼株对5个摊花品种的杭感反左和平均病价 指数分为4种不网的致病奥鲜，用10个涟机引物对20个泊株进行RAPD-PCR护增，产生FYI条DNA 带(其中51条为多态带)。使用计界机PHYLIP3.5版本分析往序进行奥案分析.20个拼试曲株突获为 9个RAPDt纹奴。相关性分析衣明。致病奥详与RAPD49胶组无听盆相关性.但与布分单引物扩场 的RAPD语型有明显对应关系。如引物OPC-15涟机护份的RAPD语型，除致八类拜VG3的蔺株外， 共余致病奥娜均有时应的RAPD柑肚语带;其它引物(OPC-05,OPM-13,OPA-02;OPL-02)BN 也有相似结果. 釜.训 大丽抢挂甘 致病性 RAPD 棉花黄葵病菌为最重要的作物土传病原菌之一。长期以来，世界各国对该苗作了多方面的研 究。根据病苗侵染后引起棉花叶片落叶与否，把病苗分为落叶型 (D)或非落叶型 (ND);用病菌 人工接种棉花品种后，据品种的抗感反应，病菌分为致病力强、肠、中等不同的致病类群，根据 病菌营养互补状况分为不同的营养互补型(VCG)。近年来，应用分子指纹技术把病菌分为不同的 遗传相似组等等。本试验在完成病菌遗传多样性分析的基础上，进行了棉花黄姜病菌致病性与其 DNA指纹的相关性研究。现将研究方法和结果报道如下。 1材料与方法 1.1供试，株和品种 本试验选用的20个大丽轮枝菌菌株，均由笔者采集和分离 (见表1),5个棉花品种 ((Siokral 一4,DP90,SicalaVl,AcalaRoyale,PimaS7)由澳大利亚棉花研究所提供6 1.2菌株保存、培养和全签因组DNA提取 分离纯化后的菌株用25%甘油制成抱子悬浮液保存在一70C冰柜，使用时将保存的抱子悬浮 液取出少许，置于PDA培养基上在18C温箱中培养3周，产生的菌落供提DNA使用。本试验 DNA提取按Roede:和Broda(1985)的方法进行，提取后DNA徽拉溶解在TE缓冲液中，使用 核酸浓度测试仪侧定模板DNA浓度，并稀释至5ng/pl浓度待用。 1·3致病性测定 种子消毒后，培养钵内培养2周后接种。接种方法是将病菌制成1X10个‘抱子/ml的抱子悬 浮液，棉苗用无菌水洗根，于抱子悬浮掖中静置2分钟后，移人新培养钵。人工接种后3天，从 ，培养钵中移栽于温室沙盆中，每隔1天浇营养液1次，10周后进行观察记载。病级分为。至4级， 分级标准参照StephenWilhelm(1974)的标准进行。根据病菌对品种的抗感反应和病情指数作致 病性划分。 1.4RAPD扩增资料分析 RAPD扩增反应液总量为25pl，反应液为1倍Taq酶缓冲液，1倍镁离子液，0.5单位的Taq 456 聚合酶，dNTP的浓度为2mM，引物浓度为100pmol，模板DNA为25ng。扩增循环为94℃预变 性1分钟，93℃变性45秒，35℃退火1分钟，74C延伸3分钟，40个循环，最后74℃延伸10分 钟。扩增反应完毕后，每样品取50反应液在含有。.3ng1/ml澳化乙锭的1.200琼脂箱胶上进行电 泳，电泳结束后，置于紫外照射仪观察结果并照相。将扩增结果整理后，愉人计算机，用PHYLIP 分析软件 (3.5版本Felsentein,1993),UPGAME程序进行类聚分析. 丧1本试脸供试口株 编号 容主 蔺株饭色 果集地点 采纽日期 1007 L目mpine6l 燕色 W.denNSW 1984年2月 1029 S习aV-1 黑色/白色