Azurin蛋白靶向工程菌对裸鼠原位结肠癌影响的研究.pdf

分类号 Q窆三窆 密级 不加密 学校代码 10542 学号 201002141506 Azurin蛋白靶向工程菌对裸鼠原位结肠癌 影响的研究 The of tumor studyazurl。n—expressing on colorectal bacteria targeting orthotopic mice cancerinnude 研究生姓名 罗超枝 指导教师姓名、职称 夏立秋教授 学 科 专 业 微生物学 研 究 方 向 微生物新药物 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一三年六月 摘 要 在胃肠道癌症中，结肠癌是最常见的恶性肿瘤，传统的治疗结肠 癌的方法在高剂量使用时能达到一定的疗效，但对人体产生的副作 用也较大，急需研究新型抗癌药物来促进结肠癌治疗。在目前的癌 症治疗和新药研发策略中，使用细菌来消除实体肿瘤有很大的发展 体肿瘤中定植，通过基因修饰引入抗肿瘤药物分子，能够特异性地 杀死肿瘤细胞而不影响其他健康细胞。EcN也是肠道益生菌，通过 口服或静脉注射，携带治疗活性药物到达胃肠道，是治疗胃肠道癌 症的较理想载体。 本研究中，我们利用来源于绿脓假单胞菌中的天青蛋白(azurin) 基因构建的抗肿瘤低氧靶向工程菌EcoliNissle1917 治疗人结肠癌裸鼠原位移植瘤，以观察工程菌对结肠癌的抑制效果、 研究合适的给药途径，探索工程菌对肿瘤的抑制作用机制。 实验结果显示，与PBS和EcN对照组比较，EcNVA工程菌静 脉注射和口服均能有效抑制裸鼠原位结肠癌的生长，肿瘤体积减小 和瘤重减轻，肿瘤抑制率达到33．7％，差异有显著性(P<O．05)。经 H&E染色结果显示，EcNVA工程菌的使用使肿瘤微环境明显改变， 坏死区扩大。经免疫荧光和Westem blotting检测结果显示，EcNVA 工程菌azurin基因能在肿瘤内部有效表达。荧光免疫结果表明血管 密度标志CD31、血管再生因子EGFR以及细胞增殖相关核抗原 Ki．67表达均受抑制。细胞流式检测结果表明，EcNVA工程菌能够 促进肿瘤细胞凋亡，静脉注射和口服给药肿瘤细胞凋亡率分别达到 9．59％和10．12％；通过Western blotting检测凋亡相关蛋白，工程菌 使肿瘤组织内促凋亡蛋白p53、Bax表达上调，抑凋亡蛋白Bcl．2表 7亚基。实验过程中没有观 达下调，Caspase．3受到活化裂解产生p1 察到工程菌对裸鼠产生明显的毒副作用。 结果表明，使用EcNVA低氧靶向工程菌能有效治疗结肠癌，口 服和静脉注射给药途径疗效相当，低氧启动子能启动抗肿瘤分子 azurin在肿瘤组织内有效表达，通过影响肿瘤细胞内的p53信号通路 来诱导细胞凋亡。Azurin工程茵靶向治疗裸鼠原位结肠癌的研究为 促进肿瘤治疗，降低毒副作用提供了新的研究方向，本研究为利用 低氧靶向工程菌治疗结肠癌提供了技术途径。 通路 II Abstract canceris themostcommon tumorin Colorectal